一次失败的脐带组织贴壁法尝试

5784630

本人近日进行了一次脐带组织贴壁法之后，发现除了受污染外，培养箱都有一种腐烂的臭味，请问大家哪位有人经历过这样的事情，该如何解决？感谢！

wshzhoum

回复 13# realinter
5 G, |) ~5 b% U. i' P* A9 X9 L( d$ w) J8 s# a5 J

# x3 C; X- W6 K    谢谢斑竹。再去收集标本，重新取取看，希望能成功！

wshzhoum

回复 12# hawkyiger $ q7 D7 B. R: ^) @# u

4 j  k8 i5 K1 M% p+ X3 V  f
3 ~2 j& e1 I# i! m' z3 a    谢谢。如果不用胶原酶，用胰酶可不可以~

hawkyiger

回复 11# xiegm 2 s2 x% @$ ]% l! c

5 _8 Q9 w. A% p7 L; O要想完全均匀铺平是不太现实的。华通胶既然是一种富含粘液的结缔组织，那么剪碎的组织块会聚集在一起。你可以用一个无菌的刮刀或其他东西慢慢的分一下，还是那句话：你不用指望所有的组织块都均匀大小，均匀铺开，只要有一部分较小的不连在一起的组织块铺开就可以了。小心处理，只要有一些组织块能够分理出细胞克隆就算成功了。

realinter

回复 10# wshzhoum
& ^2 j, |7 o3 f- f$ y0 e& `
$ y$ U) w% W( h( `可以把胶体收集到50ML离心管中，用长柄剪刀剪碎，大概2cm左右吧，再拿去贴壁，培养基可以比平时少加一些，容易贴壁点。前几天也不要老拿去看，等它贴好了再拿去观察。还有脐带最好是抛腹产的，这样污染少。

hawkyiger

回复 10# wshzhoum
& l/ I7 K- o( \9 j6 Y! n' c4 B! j7 H" v0 o! v6 g1 \
感觉必要的话先用胶原酶消化一下，然后在离心取组织块铺平

xiegm

回复 10# wshzhoum
$ p0 g, p6 d" t$ ~4 t6 f1 W) ~: D. Q# a0 }6 B6 u

6 p  f* ^8 A8 g    均匀铺平确实是个问题，我也遇到了，希望高手hawkyiger支招，尤其是细节。

wshzhoum

回复 9# hawkyiger $ y( G5 D" b! @& H+ A% G; U
/ l+ X4 Q" f! Y" b, s) t7 x2 e$ }4 z

' y. u! ^8 m( i7 Z, I" C    咱脐带提取干细胞是从walton胶中提取，脐带表面倒没有特别油,但刨开后胶体就比较多了...本身胶体不就是应该黏糊糊的么?请问您是怎么铺瓶的或者对组织块有什么特殊的处理?我铺瓶时由于有胶体,不但贴壁很困难,而且组织块都挤在一起,无法均匀平铺.

hawkyiger

回复 7# wshzhoum
) h4 M9 c: G# m8 V! E5 V2 m3 A  f1 y: `8 b! m* ~2 V: B9 n/ [
这就属于脐带状态的问题了，因为你说的那种情况在制备脐带的时候就能看出来，会发现脐带一段一段呈油乎乎的状态，在前期把那些部分舍弃就可以。如果整根脐带都这样，那就可以不做嘛。

hawkyiger

回复 5# 5784630
6 d; y6 e. ^$ d0 B! Z7 B; m
" p! h1 c& u1 v( K  O其它的也没什么了，只是贴壁的时候要尽量剪得细一点，铺完后先不要着急加培养基，否则一加就会冲起来了，而且加的时候要尽量小心，控制一下加的力度。程序上就那样，但很多时候还是跟脐带有一定关系的，并不是每根都能得到好的结果