人骨髓间质干细胞密度梯度离心问题求助(急切中)

kqyy

小弟昨天去医院血液内科取了4毫升骨髓装在新配的4毫升肝素（１００Ｕ／ｍｌ）的塑料管中,然后保存于冰盒中,约2小时后开始密度梯度离心(参数2000转,25分钟),离心完成后发现白膜层位置出现一个红颜色的膜层,形态比较规则,周围没有看见明显的白膜层,其他的层面没见明显的变化.洗两遍(离心参数1000转,5分,缓冲液PBS,我担心用完全培养基会凝血)后,接种在一个10平方厘米的玻璃瓶中,镜下观察发现视野比较模糊,没有以前的清晰(以前用EDTA抗凝),没有明显的团块,细胞量也没有明显的 变化.
' x0 n; ~0 @. V+ c) g* \, B9 R      考虑为:
" b4 y3 C, f+ Y& B              1:红颜色的膜层是纤维素凝固．
0 a7 e: q7 c% C　　　　　２：肝素出问题了，但是我密度梯度离心时没有见凝血．
- r1 K9 {9 y% ~4 X$ a  Y8 Z　　　　　３：红颜色的膜层是杂志混如了白膜层染色导致的．1 u2 k7 s3 ~6 _; M$ v
希望得到高手的指点，十分感谢！希望斑竹给他们加分！

get0715

我在做密度梯度离心的时候也出现过你说的白膜层细胞有一些条状或者是在离心管壁上挂着的一些杂质，学临床的老师说可能是因为在取血的时候没有马上混匀，抗凝效果不好造成的，产生了一些蛋白之类的物质。这种情况出现的几率较高，不同的抗凝管，不同的人取可能都造成这样的情况发生。

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我也遇到过这种问题，吹打混匀的时候没有凝块，但是离心后就出现了红细胞凝块。考虑还是标本取材时的问题

kqyy

影响分离效果和细胞活性吗?

Robert-A

当溶血和凝血的时候都会出现你说的情况，还有就是脂血时都是白白的很浑浊不清晰。所以要注意采骨髓前供体的饮食，采集过程力度和抗凝手法。