小鼠胚胎成纤维细胞的制备及处理(饲养层)

ppcl2

回复 6# qgjin
8 O. Q7 {4 p4 y9 }Feeder一般用E12.5或E13.5，最迟不超过E14.5，俺取的MEF都是去头，掐尾，去四肢，内脏全去掉，剩下的躯干剪碎，再0.25%的含EDTA胰酶消化20分左右，加含FBS培养基吹打均匀并停止反应，离心，用吸管小心去除大多上情，再用10多毫升培养基重悬，培养，第二天换液，然后一直养到差不多满了。

qgjin

4 H( l' l( ]5 f  R& D& Y8 j

俺感觉这个protocol不咋地哈，有几个人用来自E16胚的MEF来做feeder？% O5 U2 i; p$ s- C, l
remove and discard placenta and fe ...
; u% u  C% [' L# H/ ^0 ^0 Gppcl2 发表于 2010-5-7 09:50

  O/ ~! P, \+ ]) W* `" [! v

/ ]  u3 c. b- t5 t: }只是在论文中搜到的，请讲细一些好吗？（譬如：E？胚最合适？； 取哪个部位的细胞效果更好，怎么取？；终止消化要添加多少培养液？为什么？） 我是新手不太懂 请教一下。

w1986725

请教一下，是用胶原酶Ⅱ还是Ⅳ？

ppcl2

回复 3# w1986725 7 k' X- t1 T" p5 f
差不多，也是15到20分钟左右。

w1986725

都没有人用胶原酶处理的吗？我想知道胶原酶处理的时间啊！~

ppcl2

俺感觉这个protocol不咋地哈，有几个人用来自E16胚的MEF来做feeder？
, z9 O' ?4 L% E/ c' R6 Cremove and discard placenta and fetal membranes, head, liver and heart.这个也粗放了点哈！5 `% R, r+ y4 t" T$ Z
E16那么多细胞，3ml培养基，不是开玩笑吗？