小鼠胚胎成纤维细胞的制备及处理(饲养层)

ppcl2

回复 6# qgjin
$ u. H; H1 T3 x5 ^8 H* mFeeder一般用E12.5或E13.5，最迟不超过E14.5，俺取的MEF都是去头，掐尾，去四肢，内脏全去掉，剩下的躯干剪碎，再0.25%的含EDTA胰酶消化20分左右，加含FBS培养基吹打均匀并停止反应，离心，用吸管小心去除大多上情，再用10多毫升培养基重悬，培养，第二天换液，然后一直养到差不多满了。

qgjin

, E8 s3 ]: ^# D; x. S- P, Q

俺感觉这个protocol不咋地哈，有几个人用来自E16胚的MEF来做feeder？) G% W, y' j, ]1 `
remove and discard placenta and fe ...! a! L4 t9 [! s9 ~  D: Z$ v+ f
ppcl2 发表于 2010-5-7 09:50

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/ I0 z) d; [4 X/ Y2 p1 q: |
只是在论文中搜到的，请讲细一些好吗？（譬如：E？胚最合适？； 取哪个部位的细胞效果更好，怎么取？；终止消化要添加多少培养液？为什么？） 我是新手不太懂 请教一下。

w1986725

请教一下，是用胶原酶Ⅱ还是Ⅳ？

ppcl2

回复 3# w1986725 2 z1 {9 z4 [8 d7 ?( t( z
差不多，也是15到20分钟左右。

w1986725

都没有人用胶原酶处理的吗？我想知道胶原酶处理的时间啊！~

ppcl2

俺感觉这个protocol不咋地哈，有几个人用来自E16胚的MEF来做feeder？: \$ \4 A% q' D5 \9 l! c
remove and discard placenta and fetal membranes, head, liver and heart.这个也粗放了点哈！
6 S, T; d0 g4 b2 [: A& ?0 V* _E16那么多细胞，3ml培养基，不是开玩笑吗？