给实验室的朋友们提个醒！——实验室塑料制品可能影响你的DNA实验结果

dahui

据自然杂志报道，来自得克萨斯州的研究人员通过实验检测发现 ，实验室使用的塑料制品如试管，微量取样器等，影响DNA的检测结果。使用中，这些塑料制品会释放其本身化学物质到溶液中，而这些物质的紫外线吸收波长与 DNA在同一范围内，从而导致DNA的检测结果不正确，其误差可达300%。37℃以上加热时使用，使用无机溶剂 ，均可增加这种可能。: `* S; R8 d+ \$ o
原文地址：http://www.nature.com/news/2010/100423/full/news.2010.200.html: N# ^7 R7 F& j) S7 o

& P9 F$ i0 I. _+ ?8 f- x' K原文翻译，拙作，敬请原谅！+ t1 b! T# b' @" b1 g3 k4 S7 F
生物学家用标准的塑料检测管子来测量样品中DNA和蛋白质的浓度，但是可能会得到差别很大的错误读数，因为化学物质在测量中浸出到容器中。
/ e" f3 u& y8 @一种已经制定用来估算DNA和蛋白质的浓度和某些关键特性的方法就是计算这些分子在220到260nm波段的紫外光吸收水平。来自德克萨斯州立大学的研究人员研究了这个问题后说，但是通常，分子生物学中的这些方法因为用得塑料管而释放的混合成分也会在相同范围内吸收紫外光，这将使读出数值增加大约30%， “从聚丙烯管子中浸出的化学物质始终导致测量结果偏高，”Kvien Lewis说，他是一名分子遗传学家，同时也是这个研究的作者。' M  h8 w) I2 x  R4 K
研究生Michael Robson对于这种影响就很困惑，研究DNA如何有效和泥土连接。使他惊奇的是，水经过30分钟或者更长时间的离心后，期间会稍微变热，水会在DNA波长特征开始出现吸收峰。他怀疑他们的微量离心管可能是“罪魁祸首”，Robson和他的同事仔细观察了来自9个生产商的10中管子，用质谱法测定浸出化学物质的水平。当管子加热到37°C以上，还有当使用了无机溶剂时，浸出水平都会提高——在酶促反应，蛋白提取和PCR过程中。6 z5 c. i7 H+ C2 Q
“无容置疑，文献当中很多结果都是不正确的。”Lewis说，“尽管对照组合实验组样品之间相对有差异，但至少在定量上有偏差。”。他还说，还需要利用某些其他的技术来进行重新核查，比方说凝胶电泳或者是荧光测定方法，利用这些技术，浸出的化学物质可能不会影响读数，也可能抓住问题出处。5 d, [  u: M: b; p4 D- b# h
在此“故事”发表之前，Nature联系的生产商也没有做出反映。但并不单单只是德克萨斯州的团队报道涉及到实验室塑料制品。2008年11月，加拿大的研究人员在移液器的吸头和塑料管中发现化学物质阻碍了他们正在研究的一种酶的活性。就在最近，德国的研究人员报道称，标准问题Petri盘子（一种由聚苯乙烯制造的，另一种塑料），也扭曲了细胞培养分析的结果。' c+ I1 N; G0 l3 i. [, O* R
“尽管在过去两三年内这些问题不断突出，吸头和微离心管还是从大部分的渠道购买，尤其是更加便宜的品牌，依然包含有附加剂，这会浸出到缓冲液和溶剂中，并阻碍测量结果”，Andrew Holt告诉Nature，加拿大Edmonton阿尔伯达大学的一名药理学家。
9 [3 t5 j' |& U2 E. {5 w同样在临床上也发现了这个问题。去年，Holt和他在 Hadassah-Hebrew大学医学中心的同事报道，当实验室改变吸头的提供商后，在一个稀少的代谢紊乱诊断中发现一个峰。7 `2 k0 ~& g5 H
Lewis的实验室在《生物技术》4月份的一期也报道他们的结果，现在他们只使用广告中说附加剂低的管子。“这些管子可能有很多不利的地方”他强调说，因为附加剂就是用来保护塑料的，随着时间，它可能会分解或者变得易脆。5 x( ?; h- |6 B( p: e5 L
Thermo Fisher Scientific（本次研究中测试的Nalgen离心管的制造商）的公关主管，Ron O'Brien说，公司提供了在线指南帮助研究人员去判断他们销售的实验室产品含有的材料的完整性。“我们相信，用我们产品的科学家都会仔细挑选他们的材料”——这家公司在一份声明中说，“我们提供了一个很宽泛的选择，很多种离心管都是高级生物分析级树脂制造的，以此来达到多种多样的分析的要求”。

dahui

回复 6# yueyongheng . x6 R' u% `3 m
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    您说的这种方法是需要严格定量的时候才用的，如果只是做PCR参考用量的话，既要浓度和纯度的大概值，但是又不是那么精确，而用invitrogen的qubit 的话，每次用试剂盒，成本又太大。还是不权衡的。

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回复 8# weiyepan 3 u% \# b7 K, J4 D
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+ \& g; N! E+ {5 P& Q2 H    这篇文章报道的是关于管子本省质量的问题，就是说管子的材料可能会含有严重影响测量结果的的物质，而不是塑料或者本底的问题，如果只是考虑本底和对照的问题的话，那对照组的结果也很可能已经被影响了。