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! M* A# u, u" q$ u/ k# R5 ?
8 _0 L/ P: c) M 目的: 进行人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定, 为组织工程的进一步研究提供实验依据。
+ a8 {* Y9 G5 L" M* @* ?方法: 将剪碎的人脂肪组织加入Ⅰ型胶原酶消化, 离心。将细胞悬液置于6 孔培养板中, 37 ℃、5 %CO2 培养箱" J, O) H! a) B8 J5 s
中培养, 细胞达80 %融合时进行传代。选取第3 代细胞, 进行免疫组织化学染色, 检测细胞表面抗原标记物;1 u9 f+ I9 ~/ Q& b3 B, s2 r! a
选取第3 代细胞, 分为成骨诱导组和成脂诱导组, 每组又分为诱导组(加入相应诱导培养基) 及对照组(未经
5 m9 ?1 q2 M2 V) X& I诱导的细胞) 。成骨诱导72 h 后进行碱性磷酸酶(A KP) 含量检测, 8 d 后进行茜素红染色, 检验细胞内是否出5 D) b' a! K; A5 \ t/ s: G
现钙沉积; 成脂诱导2 周后进行油红O 染色, 检测细胞内是否形成脂滴。结果: 培养细胞均有CD44 、CD49d 抗
* r: \# I. W' }原阳性表达, 不表达CD45 、CD106 抗原; 成骨诱导72 h 后, 诱导组细胞内A KP 含量(01488 3 U ·g - 1 prot )
" B& q* c& M3 b8 m$ X* t较对照组(01063 2 U ·g - 1prot) 明显增高( P < 0105) ; 8 d 后诱导组茜素红染色阳性, 对照组阴性; 成脂诱导 z$ j& c9 u I3 L) r1 ?( A
2 周后油红O 脂肪颗粒染色为阳性, 对照组为阴性。结论: 利用原代细胞培养技术可成功地从人脂肪组织中分# T. J% Z2 s8 p) O
离出脂肪干细胞。 |
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发表于 2010-5-23 17:37
