求助：细胞空泡化，生长停滞

绿雪

请教各位：我的细胞之前好好的，但最近不知为什么老是长不了，而且细胞体积变得很大，中间好像被什么咬了，出现空泡，没有明显的核区，100倍镜下能见很多黑色的小颗粒，但培养液没浑浊，细胞也不会死，放置几天都一个样。烦请高手支招

Robert-A

细胞缺少营养，检测下你的培养液看看是不是某成份有问题，重点关注下谷氨酰胺和血清

hljzyydx

回复 8# 大刀无敌
6 [$ R' D" N4 f4 s" n! `5 Y: b! Z0 I
7 i% W' a9 N) S) y3 Z( L
   哦？是么？根本没有黑胶虫啊。。。

Robert-A

把你用的培养液和血清都过滤下，再有就是你得血清不要反复冻融；操作时注意快速，减少细胞在外暴露时间

angel-sakura

回复 22# 绿雪
8 D7 r4 K/ q5 \; q) V/ |是不是衰老需要需要进行检测才知道，我只能说你细胞的状态和我过氧化氢诱导细胞衰老的状态很相似。细胞衰老时细胞的一种特殊的生理状态，此时细胞内蛋白表达谱发生变化，形态也发生改变（一般是变扁平宽大），但一般无法单凭显微镜来判断。不过衰老的一个特点就是细胞不再进行分裂，只要换液的话就仍能存活一段时间，不过最终还是会凋亡的。
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2010-6-12 21:11 上传

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, y8 N8 e; J& [这个是我用β-GAL kit染色的，染成蓝色的为衰老细胞。

大刀无敌

回复 19# hndxws
, c4 c0 w. m( J8 |) h2 O& x( K5 C  P0 D1 `2 }* k
黑胶虫就是一种不存在的东西，你查看各种资料的污染源有没有具体把黑胶虫分类，其乃何种生物，动物植物还是微生物，有学者说碳颗粒有的说是生物体但是在电镜下也没有看到其结构，所以说黑胶虫就是一种不存在的东西，只是大家不知道那是什么所以定义是黑胶虫，今天说支原体是黑胶虫明天酒精灯燃烧灰是黑胶虫，如果你说存在黑胶虫请说明其结构物理化学及生物学特性。如果必须说黑胶虫存在那他可以理解为多种不知道的生物或非生物的统称。例，就如今天你看到一种生物你说不认识你定义为不知道，明天你又看到一种生物不认识你又定义为不知道，久之不知道就等于黑胶虫。

绿雪

( B  A1 Y" B7 I2 d9 f3 a5 o/ C
5 Q3 i5 d! h9 q: Q9 ?6 u, R3 {回复 21# angel-sakura
, C- O4 @; b: p7 d3 G2 Q! S+ B/ ]; F7 U2 F3 X
敢请教angel-sakura ：那么这样说这种情况是细胞衰老的表现吗？细胞衰老都有些什么样的表征呢？能否详细的给予解答，最好附写图片。谢谢！

angel-sakura

对于支原体的污染我想发表点意见，逼近最近刚学的微生物，支原体在体外是很难培养的，需要的条件较高，要加10~20%的动物血清，其他条件也比较苛刻，所以以培养细胞的条件一般是无法形成油煎蛋样的菌落。此外，我养的细胞也出现过这种情况，那是我用过氧化氢诱导细胞衰老时出现的。。。。。

lixiaodong

学习了。

hndxws

说“黑胶虫是一种根本就不存在的东西”有点武断。这些黑点可能不是生物，但也有可能是。我同样不赞成轻易用一个不知道是什么的东西来试图解释手中的现象，认真寻找原因才是正道。
; U# v. o' T5 Y3 U作者说，“培养液没浑浊，细胞也不会死，放置几天都一个样”，这说明可能不是污染，但并不能说明黑胶虫不存在。我觉得这应该与污染关系不大，很可能是血清质量不好，或者血清在解冻时没有处理好，导致培液里面营养物质被变性沉淀造成的。$ h6 V2 v5 A2 Q0 U
我觉得问题是搞清楚这小黑点是什么时候出现的，这样可以缩小找原因的范围。