关于肿瘤干细胞成球实验的细节

liutianzhu

我养过胶质瘤干细胞。
  T1 S2 s% p! c4 P  c- b. w/ _1.培养密度：文献说,肿瘤干细胞原代需要细胞聚集，这种聚集能促进肿瘤干细胞的增殖。建议原代肿瘤细胞无血清加因子培养时5*105/T25cm2培养瓶，肿瘤细胞会贴壁，悬浮细胞聚集到成球需要三天左右，三到五天后可将两瓶悬浮细胞合为一瓶养（贴壁细胞除去，干扰，耗因子）# D" N9 a, g3 J4 c* B
2.肿瘤干的传代：文献说细胞球大于1000个细胞时将其低浓度胰酶消化传代防止球体坏死。我在试验中发现，有的肿瘤球很难消化，试了几种浓度消化都没成功，细胞怎么吹也吹不散，总之看运气。我的建议是不要等到球体大于1000个细胞时才消化传代，可以在5-7天后就吹散。$ R/ g! G4 i! G) n4 w: Q
3.干细胞的冻存：一般细胞的冻存用到血清，而血清会造成肿瘤干细胞的分化。且复苏后干细胞活性差。建议不要冻存，实在要冻存建议用血清清蛋白代替血清，成本稍贵。