原代细胞冻存技术

deron

推荐一种更加简单省时的冻存方法——不知道大家有没有试过直接加入4℃预冷过的冻存液混匀细胞，然后迅速冻到-80℃。节约很多时间，冻存液是由10%DMSO加90%含血清培养基配制而成，如细胞珍贵可适量增加血清含量。复苏时用台盼蓝染色检验，成活率在95%以上。

deron

回复 6# ouyi2738
# e- U$ v" o$ {) f) B' I+ D5 W5 V我们的Corning从来没爆过，内外旋的都挺好用。至于没冻存盒了，解决办法很多的，我们通常用血清瓶子，培养基瓶子等等等等直接把管子扔进去。如果放液氮的话我们会用纱布棉线打个中药包造型然后吊进罐子。

deron

回复 9# dilal ' }  T8 C, u; L* U4 I+ f# v1 M$ q
% K/ Y0 ^% i" l, ]* i% i

3 p4 Q6 z8 a1 x. Z9 z- c: p' L    我们都是直接加的，没有影响，也许某些特殊的细胞需要特殊的处理吧，不知道他们这么做的原理是什么呢？
5 ^! E. a% M! u2 m# |/ C1 H   另外，我们配制10%DMSO的时候倒是需要把DMSO一点点加入预冷的培养液中，而不能反之——正如稀释浓硫酸的时候只能将浓硫酸一点点加入水中一样，因为这两个稀释过程都能大量产热。

deron

回复 11# morning860
7 m6 n; c2 c+ C5 o
1 Y& t3 o. p9 U' P/ P4 Y/ E) M- H2 I( y/ A9 E- J: G
    即使用程控降温仪，初始温度也不应高于10摄氏度。DMSO在常温下对细胞活性影响很大。而稀释DMSO的步骤本身就是一个大量放热的过程，所以建议先配好冻存液，4摄氏度保存。现用现加

deron

回复 13# morning860 ) A' B" y7 V# t/ E" U% ]
& L" p8 R1 x- }8 K
. V9 ~0 S6 f3 W2 g) K$ ?
    据说DMSO在十几度的时候对细胞的毒作用很大，不过我们没有试过成活率。猜测影响会有一些，但不大。: Y- J9 ?& m$ A) h% Q
   记得是先加入血清，再加入DMSO即可。我经历过一次把血清往DMSO中加，结果整管液体立马变成棕灰色——我想是血清中的蛋白热变性了