MSCs（ isolation and culture of mesenchymal ）

qq71007720

isolation and culture of mesenchymal 1 I# E5 C7 Q, q9 g$ F9 U' Y" q
stem cells from mouse compact bone8 O3 g: j8 k; y' ^6 M/ Y, |/ Z% d
各位帮我看下这些是否为MSCs- e4 E: Y% J. v. U4 s
以下全是元代7 r3 Q, c# \9 Z( }; @3 {' _5 i
做过两批（五月29日，六月3日），每次两只KM鼠
! ~: ]* @0 R' r3 O0 u骨片法（A protocol for isolation and culture of mesenchymal
/ o6 s* _1 B+ m; J4 `3 U/ \6 @stem cells from mouse compact bone）/ f- B( I/ [7 ^$ ?
培养基：DMEM/F12，血清：GIBCO胎牛血清，胶原酶消化
8 d1 z3 I1 G: V! k感觉细胞长得有点慢，最早一批也是只有几片的细胞，其他都是分散的几个细胞团0 U0 r3 j$ Z+ y) n, l
培养瓶是25cmcm，取材全部是四肢骨干

茶水

回复 8# 东方朔 ; }. d& t: w+ ?) b

" D% p4 K' H5 ~
+ K+ Q% o& O9 R0 f9 N    不好意思，冒犯了。
$ o$ _3 O) e: G; U- |只是我看成骨细胞培养方法基本类似这个方法，自己没有做过，呵呵，

qq71007720

想去东方朔老师您那里去观摩学习，请您指教！; W$ \! q7 z5 x
谢谢！

qq71007720

致东方朔先生：# W3 R4 h" y) J* B3 F
没想到会引出原文作者，SMALL WORLD！关于alpha-MEM确实考虑过，可惜太贵了，还有STEMCELL的专用培养基以及MSC专用胎牛血清也是我们这种小实验室所不能承受的，实在是经费所限。看到其他文献介绍利用DMEM/F12全骨髓法养MSCs，因此谬用之！至于胎牛血清采用GIBCO进口的。其实这我原是想确认一下您的这种方法经我经济的谬改之后是否可以呈现出您的那种世界，目前您这一瞧，看出我的问题所在，希望有机会单线联系！我的EMAIL：QQ71007720@163.COM

东方朔

  k, q2 Y+ |" p6 {; p5 ?7 [# {9 a9 A

你的意思是将骨片贴壁，原代培养？
3 g/ S- ^0 S, q- |虽然文献报道了该方法，但，深刻怀疑并非是MSC，而是成骨细胞！！4 i2 j/ I- m5 r! M7 \, P5 O
现在 ...: V! J* _3 E2 N* R- m* s: m
茶水 发表于 2010-6-10 21:12

, A: ?2 |1 _2 z1 e; C6 C! S* E
4 A, G2 G, b) i4 p% _* l& v/ p/ ]) K' v5 P* L; k8 o
    说话要有根据，至少要先看看文献。可以怀疑，请拿出你的证据。

东方朔

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8 a' ~1 E0 n- t6 R4 R2 |世界很大，世界也很小。/ |- k* u, b, N- h" ?

1 L- {& J0 f5 B6 |4 P闲来一搜就看见楼主正在郁闷中，忙着注册进来说两句，不过我想你的郁闷是有原因的：- C- j% f% ?+ A: e' t1 [
1、从你用DMEM/F12，就知道这样估计养不好MSCs，我们的方法明明是用alpha-MEM，你怎么改成这个了呢？
7 l+ a5 @/ @  P2、你用的是养MSC专用的胎牛血清吗？9 B3 ?: B3 p4 l# i# L, y
3、你照片上这些细胞都可以扔了，没有几个MSC,看着就像造血细胞。
) T$ G  y1 E: z, z# D. {% K5 r. e& \
# }! c0 S: p( T' \$ i. W请仔细看文献，既然要follow， 就投入一些吧，开始麻烦一些，后来你会发现怎么样怎么有。

茶水

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! e: T* Z9 s3 u$ d3 P! B
你的意思是将骨片贴壁，原代培养？. J4 y7 X- }! t: x: h2 _
虽然文献报道了该方法，但，深刻怀疑并非是MSC，而是成骨细胞！！
& X3 D: q; a  N$ O6 Y5 Z现在看文献，什么组织，任何方法都可以得到MSC，哈哈，可，人，为何还是会死呢？

qq71007720

谢谢，第一次用普通数码相机拍。

慕白小黑

建议你专门学一下显微镜下拍照片的白平衡调节和比例尺设定。
, M# }6 f  a6 K4 P1 Y' g" y细胞密度不一，形态类似。
3 c( o. z# ]) \' G还是鉴定了才可以说吧

qq71007720

谢谢！
/ z- ^5 }) l$ q6 Z' B' P如果是一个类型的细胞那就好了，根据文献这种方法就是纯度较高，造血细胞的污染少！
9 |# a' T3 [; W% H- T对于是否是MSCs当然最终需要鉴定，不过我就此想引出其形态方面的特点，以及解决我细胞学实验中的问题！/ W! r' P8 _: O1 `! |
非常感谢！