求助ICC的问题

lujn100

我用nestin，GFAP和Tublin，map2分别鉴定神经球，胶质细胞和神经元，做ICC时，发现信号特别弱，我不敢确定是否是染上了，抗体以前师姐用过挺好使的，心想可能是自己手法的问题，反思了一下，可能有以下几个原因：1抗体稀释液不合适，我用过1%BSA稀释，后来改用1%BSA+0.1%Trixon-100+PBS和0.1%Trixon-100+PBS，还是不行。抗体原液其实就是用1%BSA保存的......  f) j8 t9 O' [' J  x' P2 |
                                  2 结合时间不合适，我用过一抗4度过夜+二抗常温1h，后来改用一抗常温4h和一抗常温2h+4度过夜+常温1h，觉得应该够了呀4 Q0 S$ n2 U4 W1 R
                        3 BSA封闭的问题，我用的是10%BSA常温封闭1h，不会太长了吧？
+ J& z* |+ U" R- A染了几次，都不理想，很是困惑啊，哪位大侠出来指点一下啊？

duoduo777001

回复 1# lujn100
1 N4 W* u9 n# y- W$ e2 U8 T" M* B' `: Y) ?4 k" w2 r4 ~9 s

: g$ ], D- K3 B% T; u    我做的是外周血间充质干细胞和脂肪干细胞，做这个实验的时候，我们先用的是3.5%PFA，0.2%TritonX-100 15min, 1%BSA 1h RT.3 `+ L6 I* k+ {
    1抗做过室温2h，也做过4°过夜的，但是个人觉得第二种效果更好一点。二抗通常是室温2h。
9 K( z* q& E0 j! i9 A! @. v6 Q   虽然我现在做的也还存在一些问题，但是关于TritonX-100和BSA的浓度应该是没有问题的。另外这两种都是用PBS配制。
- f, q& m8 ]' E  R" v; d% B" F   因为我们做的方向不一样，所以不知道具体有没有不同。; P  J9 q' g# b% O) F1 B- Z
   再交流。。。。。。