请问有没有大虾做过细胞侵袭实验（transwell）

liutianzhu

小米的实验涉及到检测转染某基因后的神经干细胞和未转染肿瘤干细胞迁移性和侵袭性改变。" U5 e% |! [, A  A; v' [5 f8 |
    介于体内检测成本昂贵（且实验室条件限制），小米决定选用体外实验检测。$ m7 u2 f+ Y% {# s& y1 H$ v9 S' B
    体内检测最多的是用transwell和boyden的migration assay和invasion assay，但大多用于肿瘤细胞的检测：
2 J9 x. w( y# n/ a6 `肿瘤细胞  ：含血清培养    贴壁      血清趋化/ Z" L+ N, N0 B4 d1 g- s0 a/ V) g
肿瘤干细胞：无血清培养    悬浮      血清分化，趋化因子尚不确定（FGF-2？）- O* g, f$ f) z5 \' O& `; N( V
    小米查阅大量文献，侵袭实验在干细胞水平的研究是在太少：仅限几篇MSC和一篇NSC，且文献点数不高，很多东西还不太确定，望各位大虾指点，如下：6 k# M" t: u% {* C4 ^$ z) I1 r
1.神经干细胞：趋化因子？
! o8 s, i* a4 }, X" J5 W! f, D2.胶质瘤干细胞：趋化因子？
- N: S" }8 T+ b2 Y+ E0 h0 q# @3.干细胞悬浮在上室需不需要处理一下让其贴壁？
2 t; |. h+ m3 o4.下室中加因子（FGF-2？）以及什么时候计数膜下细胞？- f6 y2 C# D  {' V
5.需不需要鉴定下室转移的细胞是原来的细胞还是增殖来的或者分化来的？$ P: y; E' s5 z' ^  h8 ~2 {5 W  W
6.阴性对照不加因子？干细胞会不会无法正常生存而没起到对照作用？

ambassador

关于贴壁，这要看你是做什么实验？
3 b. Q1 M6 b& ^- C共培养体系？
6 C+ y- N& b# L, H( d趋化性实验？
  @+ _. ?  u. y; C1 U肿瘤细胞迁移实验？
  t$ @# s6 v5 w1 `! L
  z, ?( J$ p  C2 Z# }第一个不涉及细胞运动，应该让其贴壁，后两个均有运动，不宜贴壁。

coldage

本人觉得差不多，因为你只是培养细胞侵袭24小时。下室可以加趋化因子，我用的是自己收集的3T3细胞无血清培养后的上清液。

amosummer

我有做过贴壁细胞的迁移和侵袭实验，干细胞的还真没做过。但我觉得步骤应该是一样的，细胞球的话估计需要消化成单细胞才能做。