求助：生殖嵴的培养

健康宝宝2006

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高手们帮我看看是培养出来的EG细胞吗，这是培养4天后照的

褚cell

回复 esc123esc 的帖子7 {: ?1 i$ I; F9 X) d9 |7 l3 P
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你可以在低倍的显微镜下用注射器针头剥离。注意在无菌条件下操作。要不容易污染。

majing217

我在做猪的的EG，原代培养的时候，我没有铺饲养层，直接取生殖嵴及边缘部分，用猪的胎儿成纤维细胞直接代替饲养层的作用，但是EG长的不是很好，我想问一下，有没有养过猪的原始生殖细胞的前辈，指点一下啊，谢谢
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大猪小猪落玉盘

看来都是高手！

简简单单

PGCs原代培养差不多就是这样，你的克隆还行。我的也是3-4d形态就很典型了。AKP染色会是阳性的，但是OCT4等多能性因子可能有些克隆是局部染上所以克隆是不纯，得继续培养下去。

deludeluboy

新手初来乍到。我养的是人生殖嵴PGC。克隆的样子似乎差不多。很密实，克隆的边界很清楚。+ w3 R+ u6 G+ v+ m$ T+ z
但我认为比较重要的是要避免组织块贴壁，这样长出来的“克隆”周围有自己分化的成纤维细胞爬出来。解决办法就是剪碎组织后，0.25%胰酶消化，吹打，关键是要将悬液经滤网过滤，去除组织块。这样就可以保证长出来的不是组织块而是克隆了。而且饲养层太密了也不行，这样MEF也会鼓起来，看上去蛮像克隆的。MEF基本搭上边就可以了。老板说小鼠的PGC长逝要快得多，本人没养过。

esc123esc

没养过生殖干细胞，不知道13.5dpc之前的小鼠胎儿生殖脊要怎么取啊，哪位高手讲一讲~

白衣小彩

文献上是说克隆在7-8天形成，10天典型，但好像也分不同培养条件吧。不同的饲养层细胞，和培养液。关于传代文献里没见给具体的时机，只说克隆比较多时传代，太长时间不传代的话不是饲养层能不能挺的问题，而是你养的EG就产生分化了。

健康宝宝2006

感谢楼上各位的回复，尤其是两位版主的精彩点评！！我取的是小鼠的生殖嵴，还有两个问题想请教各位：1 在文献中看到说EG细胞克隆在7-8天形成，10天克隆典型，在接种生殖嵴后隔天换液，可是没提到是否传代的事，我不明白如果不传代的话，饲养层能挺10天吗？
2 }) Y. V) ?, k" {* j( c 2 培养小鼠PGC都是取13.5dpc 以前的胚胎，13.5dpc 以后PGC会向生殖细胞分化，不知道如果取13.5dpc 以后的胚胎生殖嵴培养，会得到什么，能是精原干细胞吗？
: p) B/ x/ {! u/ p/ w  希望高手给予指点，谢谢！！

大猪小猪落玉盘

1、不清楚你养的是那个物种的？
2 O9 M8 ?5 t+ }2、饲养层是不是太密了？
3 V# Q" P4 H2 v- D1 ]* r; y: K3、这种克隆看起来是，能不能传下去，多观察看它能不能继续长大
9 s# Z9 C6 T  k  S4 |, B, ?4、即使是克隆，这种克隆估计不是很纯