弱问：我养的细胞老是分化不知道为什么

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大家好，第一次在这里发帖，小弟是刚刚开始干细胞的研究，弱问一个幼稚的问题，我养的细胞老是分化不知道为什么，培养基是高糖DMEM，20%FBS，非必需氨基酸，LIF，双抗，请大家多多指教，多谢

dilal

细胞分化有很多原因，要逐一排除：4 ?+ X4 @: M9 H" m
1、LIF：是否过期，加入的量是否足够，推荐为1000单位/ml；
) M7 c" c% z8 u3 y; z2、培养基：是否定期换液，因为培养基培养一段时间后PH下降，会导致细胞分化；
$ l0 s7 T9 P' W- E5 J3、胎牛血清：加入的浓度为10%-20%之间，应提前检测其是否会诱导细胞分化，因为不同批次的血清，品质不同；
! T4 g7 U5 v3 Z$ ~" t* |4、传代过少：频繁传代能够去除分化的细胞；
; b! j. N9 B6 K# _5、清洁剂：某些清洁剂像洁尔灭，具有一定的诱导细胞分化的能力，因此推荐只用70%的乙醇进行消毒；4 N" l3 a; f3 d6 N3 r
6、培养条件的改变：推荐为37度，5%CO2；) h: t1 D, X6 }* ?. N! ?
7、ESC增长速度：慢生长的细胞容易分化，必要时需增加血清浓度；: |  ]9 x/ p; Q6 D
8、ESC的浓度：ESC过少时也容易分化；6 N7 N1 Q; X- a+ o! H$ n7 k3 ?
9、胶原：培养瓶中铺上一层胶原有利于减少组织培养板的表面差异，从而降低分化；
8 P. G, S2 a' C9 i5 s10、低水平的污染：以支原体污染为主，需要定期监测一下。
7 q* M" \4 \, I: d" p% F2 ?& d/ l, a! U  F6 \5 P9 O
回想你的培养过程，然后逐一排除一下

dilal

补充一下，你的ESC培养液中没有加β-巯基乙醇，一种还原剂，可以促进细胞生长和繁殖。建议你检查一下。

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回复 3# dilal
; O4 b  s9 `- T2 W/ n+ w$ z' J/ W5 p
多谢大哥，   可能是细胞浓度的问题，贝塔巯基乙醇加了，忘了说，哈哈

maozhuxiwo1

养的是hES还是mES啊？

上海过客

培养基是高糖DMEM，20%FBS，非必需氨基酸，LIF，双抗$ c2 [2 V2 G4 n8 V/ q

# Y; j, V1 z- B没看到 你加 丙酮酸钠 和 谷氨酰胺 啊

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回复 5# maozhuxiwo1 . J4 r3 }+ r; _8 O) B5 b3 u) `9 Y
, }( Z, w% C6 v0 @; @+ f+ ~
& Y) r( S  X# J0 E0 u
    m的，谢谢

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回复 6# 上海过客 # q! e8 A( @' E. d) b$ c/ c& r# F
3 b- r; {/ ^/ }1 \7 A
+ F3 K/ E4 r5 \' _
    加啦，哈哈，我说话丢三落四，谢谢啦

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回复 2# dilal 4 j# ^6 H- Q/ Q4 G0 V
. M8 l' o, J" L0 \9 U5 M

( Z4 K/ J" J# D+ d+ b    大哥，我再弱问一下，细胞浓度要多少最合适啊？谢谢啦

上海过客

六孔板  每孔  8万-10万 ES 细胞 比较好  。  貌似 8万/孔长的好一点  。仅供参考
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  w' s0 _1 ]' v: f: b" U/ k这个是差速贴壁以后纯化的 ES细胞的量。