求助，原代神经干细胞的具体步骤。

xfyang2007123

各位仁兄，我最近在做神经干细胞的原代取材。不知是取材步骤的问题还是所用动物为幼年大鼠不是胎鼠的问题，总之所取的效果不满意。而且里面的杂质非常多，一天不换液就很浑浊。所以想求助各位，有谁取原代神经干细胞成功的话，能不能将您的实验步骤（具体的）发上来看看，也供大家学习学习。因为神经干细胞是所有细胞中比较难养的细胞之一，所以包括换液什么的总是感觉很头疼，例如：大家是不是都离心后换液呢？传代时是直接取半量的培养基还是离心后重新换培养基？。再就是大家传代是物理吹打还是胰酶消化？等等，我感觉有很多问题还不是很清楚，所以想请教各位，尤其是已经成功培养神经干细胞的同仁们。谢谢！

rhmm

一般来说，胎鼠效果较理想，而且与你取得部位有关，至于换页要看细胞生长状况，要是状态不好的话，随时加生长因子，要是好的话就隔天全量换页

xfyang2007123

回复 2# rhmm
' }- D0 o$ g2 Z4 u$ b# e; c谢谢了。

xfyang2007123

怎么没人发取原代的方法呢？是不是都是买的细胞啊？

xfyang2007123

怎么没人发取原代的方法呢？是不是都是买的细胞啊？

jennyshy

原代方法步骤，文章中有好多，就不多说了，我这里就说一点要点的东西：一是取材的部位要准确，比如海马区；二是取的组织不能粘附血丝一些的东西，会导致后续培养出现成纤维细胞或者培养的细胞很脏，而且也比较难除去；三是将组织打散或者消化再吹到成单细胞的手法要轻柔，不要弄出很多泡沫，吸管或者用枪吹都需要抵住管底部，剪切力大效果也好；四是细胞种植的密度一定要把握好，太密太稀结果都不好。( }$ x" r" |, t6 f5 U

& P9 V1 P+ y1 R干细胞原代不太好养，多多练习，多多积累经验……我以前也失败过好多次，慢慢熟悉这细胞的特性就好了。

xfyang2007123

回复 6# jennyshy
1 r2 T( w7 K) P% h5 H8 A$ V谢谢指点。我取神经干细胞时就是按照一些论文上的方法取的，但是效果不好。而且至今我都不知道怎么除去里面的杂质，主要是小血管和组织片，因为神经干细胞球和杂质都是悬浮的。请问你们取得时候有杂质吗？又是怎么去除的呢？

jennyshy

回复 7# xfyang2007123
) l- @" s, C( j  N9 Q, u& V5 O- Z6 d; w' H9 _; C5 z$ D& j
幼年鼠比胎鼠杂质多，除了取材时要尽量弄干净些，还有就是过过筛网，再就是半量换液去除一部分杂质，不能一点都没有。

xfyang2007123

回复 8# jennyshy
  D# K7 b6 t6 Y/ p# U  R7 F; {' ]4 d看来我得改进我的方法了，继续努力了，呵呵。

huangfei2010

回复 8# jennyshy 3 E' O" A& {( I; |$ K2 s/ `

/ Z7 y* o! X5 @& B3 z5 C  s' ~
5 N2 ~9 K% e/ r$ z7 u    请教一下啊，胎鼠不都是直接取脑组织吗，好像分不清脑组织的具体结构啊