请教一个流式荧光素的问题

brian111

请问在使用流式抗体的时候，有没有各种荧光素搭配的禁忌?比如说pi不能和三通道的荧光素搭配，pe-cy5不能和apc同用之类的？另外哪位同仁有各荧光素的发射光谱图，麻烦发一下。谢谢！

火云豹

荧光抗体标记的选择指南：
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7 O# d( v1 Y9 Q0 l" j( Z. G" c4 C5 S对于流式检测最初的一步就是选择何种方法，通常是何种荧光物 质标记的抗体。厂家根据需要开发了各种荧光标记的抗体，进行 选择时首先要满足的就是所选择的抗体必须在流式上能够检测， 各单位买的流式仪功能不完全一致，首先要和检测方进行联系，看能否检测。在附表里我将常用的荧光标记物质的激发波长和检 测波长给出，可以参考。有几个原则一起说一下：
6 [# g& D' A$ m. z7 Y  f1 流式检测时首推荧光物质直接标记的抗体，如果没有直接标记 的抗体，用间接发，即二抗上标记荧光分子同样可以。不过这增 加了处理的难度，处理步骤增多，往往会不同程度影响检测结果 : Z  z# w* \2 B2 b" I
2 厂家推出的抗体有一些明确写明适合流式检测，而另一些则表 明适合免疫组化、western等，首选前者，可以保质保量，但是后 者并不是不可以用，一般来说如果没有明确的表明适合流式检测 的抗体，采用后者也是可以的，不过要注意其检测结果不一定非常理想。
9 i3 c8 D6 t. |, q* @$ s8 z5 d, P% n3 单抗和多抗均可应用。 4 l9 t. H6 t: s; b5 F7 |! ?+ ?
4 绿色荧光蛋白等本身有荧光的物质在检测时会占据一个荧光通 道，我也曾碰到几次有人将转了绿色荧光蛋白的细胞再采用FITC 标记的抗体来检测目的蛋白（据说还有人用此方法得出了满意的 结果！），岂不知绿色荧光蛋白和FITC是一个荧光通道，更本不能一起检测。
; f  s" U( P" e+ d5 如果是检测淋巴细胞这类细胞，经常用到多种抗体同时标记，选择时切勿选错。我自己比较倾向于多重标记，因为这样可以减 少抗体和细胞用量，特别是对于小鼠的血标本，经常采到的血量 微少，采用多重标记更有利。当然这要求流式操作者有较高的水平，注意调节流式仪的各种参数。

火云豹

传送荧光素发射图谱老是不成功 改日再发吧

xujie158

流式细胞仪检测时是分为几个通道的，不同的仪器类型不全相同，每个通道可以检测几种类型的Marker，另外就是荧光素激发光是有范围的，最好是之间界限较明显的，而不选择之间覆盖较大的！

brian111

回复 3# 火云豹
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& n7 L7 G* y5 a( @2 a9 ~6 ]% F0 ^3 l3 }! \
    那可别忘了，谢谢啦~找了好久图谱，就是没找到

flyingpnmc

看这个对你是否有帮助：
5 N9 [8 ~7 G( F+ K. a4 xhttp://www.ebioscience.com/ebioscience/appls/Dyes.htm

brian111

回复 6# flyingpnmc
$ ]. f2 N$ b* r* P$ M" A* R
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    谢谢！

bjchen789

学习了