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标题: 神经干细胞培养的问题 [打印本页]

作者: 从零开始 时间: 2010-7-29 09:48 标题: 神经干细胞培养的问题

本帖最后由细胞海洋于 2010-7-29 09:58 编辑
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刚刚接触神经干细胞培养，遇到了不少问题，希望大家能多照顾照顾，集思广益.感激不尽。
1、出生24h内的SD大鼠，取海马，肉眼下除脑膜及血管，可参考多数文献，都说是在显微镜下除脑膜及血管的，这影响大不大呢？7 P, l/ e0 X  ^  v3 s& E7 _
  2、0.125%胰酶/EDTA，37℃消化10min,10%血清终止消化，1000r/min离心10min,DMEM/F12洗涤一次，200目筛网过滤。接种后镜下观察可看到条索状的物质，是不是消化过头了？而且接种数小时后镜下观察发现，细胞聚集成团了，是不是消化没充分啊？矛盾中。! L$ t+ q/ l) a, t$ z! L
3、我采用的是不含血清的完全培养基（DMEM/F12 1:1+2%B27+FGF 20ng/ml+EGF 20ng/ml+2% L-Glu），可一般在培养2~3天后，发现细胞营养不够，很少出现神经细胞球。是不是我的培养基成分有问题呢？

作者: rhmm 时间: 2010-7-29 10:18

1。我做的是胎鼠的干细胞培养，一般是在解剖显微镜下拨脑膜，那样弄得彻底一些。 5 f& B3 n' ~3 D
2。你最好不要用酶消化那样把握不好度，我开始也是用胰酶消化，效果不太好我现在是直接吹打，离心后用研磨网过滤。
3。神经干细胞培养一般使用NB培养基吧
个人拙见，仅供参考

作者: lpzhdm 时间: 2010-7-29 11:25

我们采用的也是14-16d的胚鼠进行NSC分离培养，建议在解剖镜下进行脑膜分离，使用的培养基跟楼主的一样，对于是否采用胰酶或者机械吹散，应该都可以，各有各的有缺点，看自己怎么控制，我们都试过，应该都可以的，建议你多做几次，我想第一次坐可能自身操作等影响因素多些。

作者: SVZ 时间: 2010-7-29 11:32

1。建议尽可能在显微镜下剔除脑膜和血管" |0 G% M: z3 O. G0 j1 n* b
2。建议核实一下你的接种密度，干细胞培养一般需要高密度接种，一般是10 的6次方级
3。请问你是如何判断细胞营养不够的呢？是否因为没有神经球出现就判断营养不够呢。现在至少你的培养基配方是没有问题的。可以判断一下是否有污染？如没有污染，可再考虑其它原因。

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