请问有没有用磷酸钙共沉淀进行慢病毒包装 请教大家

lpzhdm

由于lipo2000价格很贵，所以尝试用氯化钙共沉淀的方法来进行慢病毒包装，按照Production and purification of lentiviral vectors （nature protocol, 2006）所讲的方法进行，首先采用明胶coating，PBS洗2遍后，种上已传3代的293FT细胞，进行eGFP慢病毒包装，使用的是四质粒系统，共设计了6.90，6.95，7.0，7.05和7.10五个pH的进行试验，3%的CO2孵箱培养，转染后第二天发现6.90和6.95较其他组亮，效率还可以，就是荧光感觉没有用lipo2000转染时的清晰，24h左右换2%的培养基，10%的CO2孵箱培养。第二天有个别盘细胞漂浮，但我没有当回事，因为lipo2000转染包装时，也会在边角部分有漂浮现象，继续培养约60h，收集病毒上清，刚拿起培养皿，整片细胞即悬浮，胎盘蓝染色，证实细胞已经死亡。
) Q# j$ L; w) e. e4 [" h    但所有试剂均按nature protocol所列货号进行购买，调置pH时，为防止污染和毒性物质的参入，我是用等量的两个管，一管调pH，记下调至特定值所需的NaOH添加量，再向另一根管加入等量的NaOH溶液。
. `  i+ ~. ^- M8 ^! D    请大家不吝赐教。

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回复 2# sciencezhu " w, s; w: _: N, F4 w8 f4 |- P
谢谢！
1 o! y# p) f2 y8 I6 N' ^8 i& `是不是转染后，12小时必须得换液，不能过太长时间，我换液时已经是25小时了，是不是这样造成细胞损伤过大。

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回复 7# sciencezhu
/ Y  A3 a/ h2 q4 }0 E, F看来我静置的时间也有些过长，估计有半小时。非常感谢

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回复 6# ganxibao11 7 I% s$ ]0 k( k) H4 ?0 F9 P
谢谢