急求解答，谢谢

静--静

急求解答： 脐带间充质干细胞原代培养的时候，将原代细胞传到培养瓶中发现细胞出现裂解分化的趋势，而且此时出现裂解的细胞处于第一代，不知道是什么原因？对此我尝试更换培养基或血清，还有消化用的酶，可是发现状态依旧不好。可是一开始原代刚贴壁的细胞状态极佳，就是一传代后细胞出现很奇怪的问题，表现是从细胞核上出现了一个个的小球形状的裂解死亡的细胞碎片。而且细胞生长缓慢，换了新鲜培养基后，仍不见细胞扩增，请哪位高手指点迷经啊，万分感谢！

lchanlon

细胞长到什么情况的时候你开始传代啊？你的细胞是不是污染了啊。

chuanbaozang

感觉可能是消化过度有点受到损伤，还有培养基可能有问题。曾经见过GIBCO的一批假的培养基，每次养细胞刚开始还可以，传代后就挂，更换了后好些了，或许对你有用。5 }9 J$ Z1 |5 o9 }) ^2 Y6 ], X
我觉得如果都没问题的话，可以在培养基内加入适当的因子和添加物，这样可以促进细胞贴壁、生长，还可以防止其老化，可以试一下。

胡问成

回复 1# 静--静 * j! I% ?! B# P' b1 N5 y
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感觉好像是消化过了，你看一下你的酶有没有问题，我一直用的是Gbico公司的胰酶替代物，感觉还好，　　　　　　　　　
& V$ i% X( Y; ^$ }# B9 D- cＭＳＣ一般在１０代以内状态都还好，最好是在全７代。　　传代的密度也很重要，密度太小长的也很慢，- v; W# [0 f( c% T2 K
还有传代后第二天换液，后如果没有特殊的且细胞不太多并不需要每天换液，因为ＭＳＣ自身有分泌功能，会分泌
8 s, I5 a% `* k4 H6 l/ o1 P; V一些细胞因子促进自身生长，换的太频也不太好，　培养基用ａ－ＭＥＭ，是一种相对选择性ＭＳＣ培养基，我个人觉得ＭＳＣ6 x% u, S( F' X7 l+ k8 B
只要正规操作不太容易污染。　如果条件许可血清也用Ｇｂｉｃｏ的，２８００人民币５００ｍｌ　就这么多吧