胚胎干细胞培养中的分化问题

上海过客

什么类型的细胞都不说 ， 灵长类的细胞和 小鼠的细胞  方法都不一样的 。* Z( Q. J+ d8 W; n% e

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- w: D0 s1 V/ _2 |! n都不知道你养的是什么细胞。

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我和我师兄最近两个月培养胚胎干细胞时常常出现部分细胞分化，而且细胞密度不够传代标准。师兄就想将分化细 ...
0 a: i- [7 S4 U1 Q7 [dilal 发表于 2010-8-7 09:48

9 a. W" S: a. \0 }$ [; R
, G- R; [% H; G" X+ j# O/ g3 [- d

9 p; w+ N% U. r8 Y4 e9 `    如果是小鼠的  ES细胞 ， 一定要吹打成 单细胞 悬液 。 如果镜检还看到有 多细胞团就 可能分化 。  关于你说的 细胞密度不够传代标准，不知道你是什么标准 。
- Z* E% l: m( X& ~  
9 H5 v5 `; Z0 `& ~/ P( P   如果只是部分细胞分化 说明 培养基没有什么问题 。 * [: W6 N: J0 p9 V, `$ ~
   分化的细胞如果不多的话，没有必要除掉 ， 传几代就没有什么问题了。6 f0 b' s5 z- g& K( i
   " I. Z' l9 ^& f' g
   如果是用 feeder-free  培养的细胞 ，我觉得有分化的细胞 是非常非常正常的# n8 G' M# e% K
   6 J$ x0 J( ^2 L
3 q) n  u5 i1 B. ^; U. ?
    我试过用差速贴壁纯化的 细胞  8万-10万/6孔板每孔，自我感觉效果很好 。

上海过客

刚好有一篇 山中的 文章 ，就讲的是  聚集的细胞的分化问题

上海过客

人的ES细胞，家兔，猪  的ES 干性维持 通路 和小鼠的 干性维持通路，目前认为不同。" H3 q% t+ e$ `# R7 Y

8 G6 G$ x9 ^2 N人得 ES细胞目前认为 消化成为单细胞的话 会凋亡  ，具体的通路与 ROCK 这个 基因有关。
0 n' o2 L$ ]- f9 z 现在有用ROCKinhibitors 来抑制 人ES细胞克隆的单细胞凋亡  。 用 关键词可以搜到相关的文献。   ) g! ^2 I" e( }

8 @2 P, X& t: {" w3 w& p   目前认为 可能 人得 ES细胞培养条件还不成熟，培养出来的ES细胞有可能不是 真正的 ES细胞 。    找到 理想的 培养基条件以后 可能  现在的人得 ES细胞的传代不会像现在这么难。

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我的意思是分离人ES分化细胞和未分化细胞是否可以用贴壁差异法？
# v8 u* P' \' W; x+ g2 b' xfarmer 发表于 2010-8-24 17:34

, j1 ?! b2 q0 \6 P; N

, [3 I+ s+ {5 J6 {1 z3 L不能 消化成单细胞 来传代 怎么 用差速贴壁的方法呢？