求助：关于ESC对于G418浓度梯度的确定

cony

大家好，我近期在做ESC对G418的最佳浓度，现出现问题了。第一，加G418培养ESC的第三或四天开始，MEF连同ESC从12孔板边缘开始卷缩，之前做过一板，还没到10天就已经缩成米粒大小乳白色物体；第二，未加G418前，细胞状态不错，并未见污染，但是当加G418后，可能由于死细胞较多，出现许多会动的小点点，怀疑是出现污染；第三，由于本人没有NEO-MEF FEEDER，所以筛选时FEEDER是用普通的。7 v* \8 d+ ?) p0 x5 |% g0 ?
       还有就是在做梯度时，非得要筛10-14天吗？ESC繁殖很快，隔天就要传代了，而且要每天换液，每三到五天换液是否对ESC本身生长就是一个挑战？如做个一个星期或更短的筛选可行性如何？
. x  }2 ?0 h& x( @' P% H        请做过或了解的朋友帮帮忙，在此谢谢大家了！

绿雪

我不知道MESC和PEF的筛选是否有存在重要差别，但我做PEF筛选浓度的确定是以第七天全部细胞死亡的浓度做为筛选浓度，以减量浓度为维持浓度的。另外，筛选时是每天或隔天换液，两周后换成维持浓度的进行培养，维持培养是3-5天换液。

cony

回复 2# 绿雪
3 V: P1 A% z9 z! G- |
2 L- h  G  p4 f0 w" tMESC与PEF的筛选最大差别就是MESC需要MEF来支持其生长，一旦加药，MEF将会死亡，那么MESC别说筛选，就连生长也是个问题了。谢谢你的回复。

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