奇怪，神经干细胞消化后传代后细胞都消失了？（附图）

xfyang2007123

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昨天给原代的神经干细胞传代（是第十天的原代细胞），传代前干细胞球还是挺好的。但是我用0.25%的胰酶消化成单细胞再过两天就什么细胞都没了，不知什么原因？请各位帮帮忙看看。我的胰酶是配好2月在-20℃冰箱里存放的。传代方法是：1。将培养瓶中的悬浮细胞及培养液吸入离心管1000转每分中离心5分钟。2。经上清液的一半加入新的培养瓶中（半量换液），其余的上清液吸掉，在沉淀中加入胰酶混匀，边用吸管吹打，约十分钟。3。再离心1000转每分 5分钟。4。吸掉上清液，加入新鲜培养基混匀后转入培养瓶中。因为怕用血清终止消化的话已引起神经干细胞分化，所以没用血清终止消化。不知道为什么到第二天一看，什么细胞都没有了，只有些细胞碎片。 6 F4 F5 M  m( m0 A$ U  d
这是传代前的神经干细胞球，大家看看应该没什么问题吧？

uyunbilig

我觉得消化过度了，我在澳洲的实验室时候他们是BSA代替血清停掉干细胞的消化的 。

uyunbilig

我觉得血清替代物应该也能停止胰酶消化，纯属个人的想法 我没试过！

rhmm

我的也是，用同样的办法，有的时候可以，有的时候就不行，原代还好说，传代是个大问题，不过我觉得你的很可能是胰酶消化过了，我培养的时候根本不敢用胰酶，那个神经球太娇气了，我就是吸取悬液后直接吹打，离心，去上清，吹打然后又种植在培养板上，你那个有点复杂，为什么还要留一半上清呢，是考虑到神经细胞间的旁分泌了吗

rhmm

我的也是，用同样的办法，有的时候可以，有的时候就不行，原代还好说，传代是个大问题，不过我觉得你的很可能是胰酶消化过了，我培养的时候根本不敢用胰酶，那个神经球太娇气了，我就是吸取悬液后直接吹打，离心，去上清，吹打然后又种植在培养板上，你那个有点复杂，为什么还要留一半上清呢，是考虑到神经细胞间的旁分泌了吗

dulaiyouyu

你的原代的神经球是没问题的，传代时，可能是酶消化过度，建议使用比较温和一点的酶，不要用胰酶啦。也有可能离心的时候出了点问题，会不会沉淀里只有碎片，活细胞被你弃掉了呢？

exin11

胰酶处理，消化过度，没有终止消化……都会导致细胞碎裂！# D! _0 l- K0 _
再者，离心转数可以再低点，900转4分钟。
4 }6 v* ?7 f8 }0 g0 W0 C% O不知道你的换液与培养环境怎么样？

xfyang2007123

回复 2# uyunbilig
; ~: b' ?  f! X; L4 i谢谢，我试试您的方法看吧。

xfyang2007123

回复 4# rhmm
4 l& O1 B3 l) G9 ~9 S; R我用吸管直接吹打时，干细胞球分散不开，所以就用胰酶消化了，您是用的吸管直接吹散的吗？因为看很多文献上都是半量换液，所以就采用了。

xfyang2007123

回复 6# dulaiyouyu
& T" o, P& n5 N7 G& m$ b我离心完后在显微镜下看了，还有干细胞球的，所以应该不是离心的问题吧。