做细胞免疫荧光的时候为什么细胞在透膜之前就都掉了

taoqilh

我在做小肠上皮细胞的免疫荧光的时候，用4%多聚甲醛固定30分钟后透膜，可是再透膜之前细胞就全掉了，请问问题是出在哪呢，我在操作过程中很小心，液体都是沿着壁打进去的，为什么细胞还掉呢？

sfk06

你细胞掉可能有以下原因造成的：1 和该细胞的特点有关，即你贴壁所需时间是还是短。这个你可以通过细胞培养知道。我没有养过这个 2你做实验时细胞状态不好，这个要考你养细胞的硬功夫了 呵呵 3做实验时细胞掉是正常的，不过要有足够细胞 进行试验，不然就要想办法了4 {( h- t6 B! N6 }' d+ x) N
我认为你的原因有以上的一个或综合原因。建议：在做一次试试

exin11

不同细胞类型，贴壁状态不同，有松有紧，像猪成纤维细胞贴的紧，小鼠的Gsc挺松。
" M% k* T1 f' H' }! A* T) _不知你的盘是什么公司的，有的盘壁附性缺失不好！

grace

回复 3# exin11
+ l6 M* S6 v% t. S1 S; w2 m- y/ P: q% v# H; ?1 a: c  \. s3 B, |. a
0 N' @, L0 ]5 l$ e4 c
可用鼠尾胶原包被coverslip;6 m! F5 z. h: T/ t4 `- L
另外确定你所加药物是否会影响细胞贴附；$ C) w1 A* D4 Z; b) p, ^7 V/ {4 y
若做confocal,可用costar的petridish。

exin11

回复 4# grace 6 Q! Y+ R* [; `. X

4 @: X( S4 P3 N  Z6 K; x0 p1 B! D9 o/ X3 y+ Q& m! m+ i1 o; ~5 ^; h  L. D% `# z
    你咋回复我了！？呵呵

sfk06

对了，可能还有一个原因是因为 你的片子可能不是太干净。你可以用多聚赖氨酸处理下 我正在考虑这方面的内容 呵呵 祝成功

上海过客

有一些还在就行了 。  观察的话也只有一部分细胞

yueyongheng

细胞不贴壁有很多种原因：
' X; |+ P3 b4 i6 q+ G  ^8 {+ F1、胰蛋白酶消化过度
" A7 M$ W3 m: W* ]% @/ v: A& R+ w2、支原体污染. {2 A% \+ A2 p3 I) _; X9 e! R
3、培养瓶瓶底不干净
9 P& V; i. k: F( d$ G) f" C4、培养液PH过碱. `$ ]" @) A( L9 O2 A$ [
5、培养液配置、储存有问题
+ c6 Y0 T# l$ X4 F; Q6、细胞老化
6 W' u6 |! f! O$ S" ?7、接种细胞起始浓度太低或太高9 \0 N0 U: h6 I
PS：仅供楼主参考，请楼主根据自己的实验排查问题所在

chchqq

有道理
6 U$ K  M! V+ j4 ?7 h+ u