做细胞免疫荧光的时候为什么细胞在透膜之前就都掉了

taoqilh

我在做小肠上皮细胞的免疫荧光的时候，用4%多聚甲醛固定30分钟后透膜，可是再透膜之前细胞就全掉了，请问问题是出在哪呢，我在操作过程中很小心，液体都是沿着壁打进去的，为什么细胞还掉呢？

sfk06

你细胞掉可能有以下原因造成的：1 和该细胞的特点有关，即你贴壁所需时间是还是短。这个你可以通过细胞培养知道。我没有养过这个 2你做实验时细胞状态不好，这个要考你养细胞的硬功夫了 呵呵 3做实验时细胞掉是正常的，不过要有足够细胞 进行试验，不然就要想办法了! e7 k3 p* B; E9 {- f" `
我认为你的原因有以上的一个或综合原因。建议：在做一次试试

exin11

不同细胞类型，贴壁状态不同，有松有紧，像猪成纤维细胞贴的紧，小鼠的Gsc挺松。6 l: C1 T/ x( O
不知你的盘是什么公司的，有的盘壁附性缺失不好！

grace

回复 3# exin11 ' {2 q- @7 m* Q6 `& |! Y* y

6 E+ C- n9 C5 k0 @( A5 Y3 o
) y9 ~4 M7 H3 a& W: j7 s1 @# g2 g可用鼠尾胶原包被coverslip;" L" c+ j4 d; x3 W3 R
另外确定你所加药物是否会影响细胞贴附；& G: t7 A$ L8 X
若做confocal,可用costar的petridish。

exin11

回复 4# grace
. [9 p3 C* C# H9 [" [
6 {) Q6 K: o9 b! d) d* {* `5 S+ `+ S) C4 c; P0 F
    你咋回复我了！？呵呵

sfk06

对了，可能还有一个原因是因为 你的片子可能不是太干净。你可以用多聚赖氨酸处理下 我正在考虑这方面的内容 呵呵 祝成功

上海过客

有一些还在就行了 。  观察的话也只有一部分细胞

yueyongheng

细胞不贴壁有很多种原因：
+ Y! [9 {% P- ?1、胰蛋白酶消化过度
( j, @: V5 P8 ]2、支原体污染5 F' S& e$ c( Q8 e0 V
3、培养瓶瓶底不干净
( m* A1 g+ F; x4、培养液PH过碱
+ E" T! F9 k* T! s0 x/ Z5、培养液配置、储存有问题; ]5 _- a8 i9 J. Z
6、细胞老化) I8 r% ]% o: C- c# U: i
7、接种细胞起始浓度太低或太高: T! x0 M8 Q/ X8 w7 B4 [! Q3 p* A
PS：仅供楼主参考，请楼主根据自己的实验排查问题所在

chchqq

有道理. {; w: `$ j  |" ~8 f" h