内细胞团挑取的最佳时机

zhbshi998

我在做C57小鼠胚胎干细胞培养，自己从3.5d囊胚期胚胎取胚胎干细胞，我做过将囊胚取出后抑制分化培养，培养后3-4天、5-6天和7-8天挑取胚胎干细胞，自我感觉时间过长有分化，并且越后面分化越快，3-4天和5-6天两次挑取的结果是都没有活，不过极有可能是我自己操作的问题。我在文献上看到有的说5-6天挑取比较合适，也有说C57小鼠是3-4天为最佳时间，我就不知道到底什么时候比较合适了。我已经在这一阶段浪费很多时间了，前面小鼠受孕状态一直不好，现在希望尽量少浪费点时间，有经验的告知一下，谢谢！（正长着呢，前面又挑了一次，4天，不过没看见有长出来的，也不知道是哪里出了问题，马上又准备挑一次，但是不想浪费了）

gemstone

你的培养系统有没有问题？比如，培养液是否可以正常培养ES细胞，饲养层是否合适？等等。原代培养你是在什么板里面培养的？有没有用油滴培养？总之，影响因素很多，不要老是纠结在挑克隆的时间上。

zpzp0312

有道理
3 w$ G; B3 D" ^( _! ?1 z刚才我也在考虑这个问题* c& I- k* d( ?7 q
看别人是怎么回答的5 P0 \$ p0 Q6 x5 @- V
呵呵
  E2 b+ ?% ?! w' f楼上说的有道理，挑取时间只是其中一个因素
+ w( h) k4 ]8 q# ]3 j+ X* S分离过程中的影响因素很多，都要考虑
( P( L; C, B: x1 R3 I/ n$ j并且楼主说，挑取两次都没有活2 _; ?1 \- x/ X/ c
因此，我认为，楼主的消化时间和程度或许不太合适& l4 d! Y: n# d+ ?* r% r
造成离散的ICM细胞死亡
5 a1 P& E1 P  v0 N因此，建议优化消化操作
; O5 t5 ~5 q5 T挑取ICM的时间姑且可以先定在第四或五天，区别应该不大；并且，选择透明度高的ICM进行离散。发黑的ICM可以不用

懵懂干细胞

我也觉得楼上说的有道理！9 u+ P6 H5 l& R- h" U
http://www.stemcell8.cn/thread-25660-1-1.html
% a, n  f& L1 h; k我这里有些文献你参考参考！像这样的问题只有当事者才是最佳的解决者

cony

考虑影响ICM存活的因素逐一分析。9 m2 v. G0 ~8 g. g1 N
1，MEF，处理是否适当
) O2 d( _2 P- M7 S3 s' ?9 m2，养囊胚的medium有没有问题* ?& g1 L  ^! V" Z
3，机械分离时有没有伤到ICM7 D6 i: z! j9 b: z4 J  a
4，消化ICM是否过度

yeshdo

我分离过，操作是次要问题，主要是培养环境。我现在培养的就是自己分离的C57小鼠胚胎干细胞。