3.5d囊胚培养

zhbshi998

我做小鼠胚胎干细胞原代培养，取3.5d小鼠囊胚进行体外扩增，前面养的感觉还好，虽然没有一个挑取成功，但是内细胞团扩增感觉很好，有的形态规则，有的形态不规则，但是折光度很好，但是最近养了一点感觉发黑，折光度一点都不好，不知道是什么原因？还有就是在挑取内细胞团的时候一般都用什么工具呢？我用的是自己用毛细玻璃管拉的细针，我也不知道这样会不会对干细胞有影响。挑好后，我用过两种方法进行分散，一是胰酶消化，0.05%浓度，二是一毫升注射针尖机械作用，不过我感觉这浓度胰酶也不好消化，又担心浓度高了会影响干细胞活性；机械作用更不好操作，感觉损伤很大，不过做得都很失败没有成功，很是郁闷。为了能够做出来我觉得自己已经很认真的做了，没有结果现在感觉很累，我一直都是一个人做，老板又不会，我们这里也没有人做过，真是求助无门，很希望有高手指点一下，非常感谢！！！

zpzp0312

你们老师不负责任！～～～
1 P- |; I& I+ y/ @他都不会就让你做啊？
6 ^- j% B4 j1 a2 R* u# a过分！

cony

我师妹做过这个，帮你问了一下，把囊胚接种到MEF，ICM贴壁后，跟你一样也是用针挑出，然后直接放到ESC 培养液培养，不要消化，等一到两天，可见克隆团扩增，此时你再消化传代。最后每次尽量多挑，获得的ICM团尽量多点，这样我觉得ICM之间有相互的信号接触，对增殖有一定的促进作用。

zhbshi998

谢谢各位啦

lxl069

回复 2# zpzp0312
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    我更惨，我做人的，老板也不会，老是做不出来，郁闷ing