美天旖CD133磁珠分选完全失败

jooerss

之前用了美天旖的试用装cd133的磁珠，ms的柱子  ，分选细胞为人结肠癌HCT116  两次分选结果 第一次分选出CD133+ 和cd133-细胞 流式检测 阳性细胞前者在90%，后者在80%  等于全变成阳性细胞了     第二次分选，同样细胞同样条件 ， 阳性细胞前者在1%，后者在0%  等于全都变阴性细胞了  有耳鼻喉的同道也在做美天旖的CD133分选 他们同我第二次一样  也是基本选不出阳性细胞   请教前辈们 有没有做过CD133或者类似的美天旖磁珠的分选的？ 结果是否理想/ L1 z7 Y- K, F4 P: S. C
？
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7 ^' U/ e# K* r6 y另：分选常有堵住事件发生 ，总结到DNA酶消化，细胞过滤 以外 有没有其他的可能引起堵柱的原因？

ambassador

学习同问。

liyan2008

回复 2# ambassador
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   细胞太大了？文献有报道会有多少比率的阳性细胞吗？

aoc_chen

我觉得你应该先看看别人的这样的细胞系用cd133分离的比例多大

chendongbo338

细胞量太大时，也会堵，细胞量应控制在10的7次方之内

ambassador

提高细胞初始密度的方法，一是可能堵管，二是会增加分选的误判和浪费，细胞太多读取分析的时间短，判断就会有点影响。
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改用流式细胞仪？

dwc326

我做的是结肠癌原代组织标本CD133分选。柱子好像是LS的。分选的效果也不好。
. W( g' I5 D0 O) L7 Y! i分选前先流式检测原代细胞的CD133起始表达量，文献报道的结肠癌中CD133表达量在2%~6%左右，但是经检测实际原代细胞的表达量好的也就不到4%，有几次根本就没有CD133阳性细胞，那就不分选了，考虑跟标本的质量有关。
# C% E. I" q2 P再说分选的吧，分选后阳性细胞群的阳性率多在10%左右，也就上升个3倍左右，但是阴性细胞群的CD133阳性率也会达到1%，曾经联系过技术支持，建议二次过柱，说明书上也有这个建议，试过一次，阳性率较可以达到50%多。但是这种方法可行性差，主要原因是经过一轮分选后阳性细胞数量少，经不起折腾，而且耗费抗体和柱子，成本太高。( C7 u2 s8 s. f) S: G5 r
现在固定程序就是分选前检测基础表达量，有表达就分选，分选后再流式验证分选效果，但是一直都不好。
9 X# K3 G: z! x* Q/ [至于堵柱子，我们的办法就是孵育抗体前，将细胞悬液用300目滤网过滤一次，特别是消化过度，核酸析出过多时效果很好。过柱前重悬细胞时再加大液体体积，堵的很少！