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[讨论] 都说无菌操作要这严格那规范——大家不妨晒晒自己的豪放操作吧!也给新手们打打气   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-9-6 21:38 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 deron 于 2010-9-6 22:01 编辑
: W7 ~& c' o) W  ^& g$ p  K
. ]9 j2 i  l* x: q0 R' F: {1 u6 r半年多细胞养下来,我们一致认为养女人比养细胞简单多了,起码她们不会动不动就死给你看。。。) v) V$ c5 W) \4 z! h
开个玩笑,都说万事开头难,不过跟细胞混熟彼此了解以后,就可以很随意了。! F4 B  k) n# J, v* t6 Q
1.进出实验室一套白大褂不带换的,经常出去买个饭,回来接着进无菌室。+ R3 n3 y( [4 Y4 U7 _! f- Q; q
2.不戴手套,喷点75%的酒精就上台了。- u7 @- W/ v# C' r5 q+ l$ X
3.师妹一次换液烧瓶口的时候突然酒精灯蹿火了,她下意识往瓶口那儿一吹,火焰立下就灭了……不过后来细胞也没事儿(特技效果慎勿模仿)
9 x3 f7 X: k; ?9 ]2 i' a4.冻存细胞不经程控降温直接从4度扔进-80冰箱
* c. K2 @! E9 k% c! d2 H& Q& I5.帽子口罩爱戴不戴
# S- n0 k: r; m6 c1 ]+ f; V5 q6.兴起时穿着休闲的衣服,进无菌室往手上喷点酒精,打开培养箱,捏着瓶口就上显微镜观察; J- d' Q0 e1 m, w; Q8 x
7.胰酶血清直接扔进40度水浴化着,有时候化开好一会儿了才记起来。
) J3 V# K8 s9 ~8.培养基和缓冲盐溶液直接扔到台子上照紫外。
) ?( r( p; P8 y6 _- s9.急用器械又来不及灭菌的时候,拿个小铁碗倒点酒精进去,扔进器械点上火烧一小会儿就行。
& F: U, }. b4 y9 d10.组织块“吧唧”掉台子上了,夹起来用缓冲液冲冲接着用。
3 N) ?$ J5 Z& N) n) j11.有一阵子酒精灯坏了,就只开着风机“裸”操作,居然没有问题。
$ Y4 z( z% B. Q# a得到的几个结论——帽子口罩手套白大褂不是保护细胞是保护自己用的;无菌室无菌台本身的洁净远比几个酒精灯火焰来得实在;很多东西你晓得成分原理之后自然能够游刃有余天不怕地不怕了。; w; Q, A. D6 _6 c  z* y
也惨过,右手有三四个月一直处于无毛的荒芜状态,细胞有两个月就是不给你好形态看,有一次给所有细胞换液时搞错了培养基结果差点一个月心血全流掉~~~/ [8 @$ m. }) B# O* k
话说实验室一大姐大级别的人物第一次给96孔板换液的时候把板子从超净台里拿出来,华丽丽的往垃圾桶里一甩,接着又一甩……结果染菌了$ P" j& C/ j: S, g

  G% n2 r" i$ t! T6 w/ W4 j/ S也不能毫无章法,个人以为三个必须的原则:
6 K& X1 g) P: _& _/ ~$ R* Y# |1.操作必须保证在超净台深处,移液管等与细胞直接接触的物品一定要悬空不可与台面接触。7 q$ h  N$ f8 g9 T, J9 H
2.实验前的30min紫外消毒很有必要。  ^+ |3 g. m/ W5 \2 Y
3.操作结束后彻底清理实验垃圾。
2 ~, q  D$ j+ B0 R4 E8 r0 I4.培养箱定期消毒(最好有一个记录本),无菌室定期清扫(除尘)。
- d9 O# R2 I5 r% i* {% y. E, d- t. U7 u1 E7 G5 m) v  B/ Z& o
私底下还是很得意自己的细胞操作技术,染菌率在1%以下
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沙发
发表于 2010-9-8 19:53 |只看该作者
的确够豪放!不是一般熟练的操作员是做不来的~哎~中国这个盛产熟练工的地方~

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藤椅
发表于 2010-9-8 20:15 |只看该作者
凡人勿模仿~

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板凳
发表于 2010-9-9 08:31 |只看该作者
呵呵,其实每个实验员都在不经意间走进了豪放的行列

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报纸
发表于 2010-9-9 15:42 |只看该作者
1、2、5、6、9,以前我们经常这么干,后来开始搞ESC和iPS,我们所长怕我们污染代价太大,强烈禁止了。8、10、11偶有发生。. A+ r+ q/ A# H6 V- q" c' v: A" C$ D. X
有几次赶时间,细胞换液时直接拿培养基瓶子往细胞培养瓶里倒,结果当然没事。
( R; o/ O$ R4 G9 K' j9 m说说我小师妹,刚进实验室那会,有次给细胞换液,由于细胞较多,叫小师妹帮我把先换好的细胞放进培养箱,结果第二天发现有两瓶被她神差鬼使的放进了冰箱,拿回孵箱继续培养,和其他的没什么两样,细胞为MSC,估计要是ESC就要分化掉了。
/ J) K7 L/ m4 X2 X) @: k还有次细胞消化离心,小师妹兴冲冲的拿去配平,结果把配平用的水加到细胞那管去了。搞得我直接收工回去了。8 C/ V/ p0 u/ n6 j, Z# Z
新手刚进实验室,还是要盯着,不然很容易犯些不可思议的低级错误,恩,可能是high过头了。
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地板
发表于 2010-9-9 18:05 |只看该作者
回复 5# anxjs
. t# J4 e% y# i6 `' _! }3 t2 V2 n3 K7 |$ O6 L/ Q( D

4 C; t" t( g( m* p, D" }" [/ A    哈哈,其实新手也可以给很多启示滴。好多自己习以为常的习惯经常被人刨根问底地问及到原理时才发现,基础不是那么扎实——也可以弥补自己的体系漏洞

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7楼
发表于 2010-9-10 13:40 |只看该作者
12567经常的,现在还是穿大褂操作了毕竟还是要保护好自己

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8楼
发表于 2010-9-19 19:02 |只看该作者
这也要鼓励嘛?

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发表于 2010-9-19 22:34 |只看该作者
呵呵,很佩服那位大姐大级别的我也想试试。我最搞笑的一次是,dish被contamination了居然不知道(因为细胞还好好的),还给老师欣赏了下我的大个iPS,后来被老师嘲笑那是霉菌感染,结果全incubator大检查,霉菌一大堆,真个incubator都out了……
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10楼
发表于 2010-9-21 11:57 |只看该作者
不敢豪放,不豪放都出错。
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