贴壁培养神经干细胞

smkx

请问有没有人用贴壁培养的办法养NSC?
1 M! z  c4 q% V/ a; m效果如何？

iseeyou1210

上周去uk开会听人说了,效果还不错,我正在要protocol.) S6 r- q& |& t# X/ ^
等等把.

smkx

回复 2# iseeyou1210
0 F' t* a: f2 \- L+ w% k/ {4 z2 [; O9 u

0 E' }. B) T& b) Q2 t3 M/ P    好，等你好消息

深海寂寞鱼

to smkx兄：4 w7 @0 L* ]2 O/ u3 ]: t; Y" ?
# S& B5 l- J& V1 A, G9 \, Q+ q8 I
    贴壁培养神经干细胞效果十分不错，细胞的增殖状态要比悬浮的神经球培养好很多；' [# v7 v5 E2 N" n3 q: Q

1 O3 k/ C( d( l* Q1 T    而且未分化细胞的比例也高。, P0 a" W0 n4 [% V

  I- ]' k/ R* z* m    培养的方法和咱们通常用的方法大同小异。
0 Q, p! }: \4 M4 p3 Z# \! n7 m6 ~. R/ t( q' s
    首先注意把培养皿／培养瓶要用Laminine包被好，通常是按1－2ug／cm2，37oC包被过夜。说明书上说的是包被3小时，但是包被过夜效果会很好。+ G/ M* m4 F2 Z9 G% K
% `8 X" Y1 S+ w) O& h
    ～～～～，不过Laminine可是相当贵的，每用一点点我都心疼不已。
2 c4 q* `, L: R: B
2 D$ S! W- g! C3 i, P    其次，这个方法最初作者的培养基里N2是自己配制的，提高了N2里每个组分的浓度，他认为这样有利于细胞的贴壁。但是我培养的时候没有按他的方法配制N2，还是用的invitrogen商品化的N2，觉得效果也不错。
4 U9 `9 p+ s& ]. u& j: ~5 J% \+ |/ X& l' y* R1 W
    再者，我是用sigma的Accutase消化的组织（37oC，15－20分钟），觉得细胞的活性很好。
* B2 J- e, e8 C) R4 t: y6 \+ D
    最后补充一下，这个方法不是什么新东东，在一些研究神经干细胞的实验室这是一个很成熟的方法。只要认真按照经典文献去做，一定能够成功的。
% t5 V0 \9 k( u8 d
$ i& N: U5 q9 X* y2 H) _* s% c    祝好运！！

smkx

0 d2 {+ i  B9 R4 Q2 ]: \7 R: R
/ z; f# v$ G7 C# Z4 j0 f7 e( B回复 4# 深海寂寞鱼 8 G! W" `8 v" K1 X: K) v6 v& V

: {( w7 {" |! u) [# N: ?+ K# U
- Y3 T3 X' I9 l" {" W    谢谢这位前辈高手，不知道您说的经典文献是哪些篇，可以传上来或者告诉我title吗，再次感谢！

深海寂寞鱼

回复 5# smkx
+ B# [, W# P9 R& r4 o: J  C
! s5 G  ^+ L7 a# S( mto smkx兄：
/ U% _% I% n$ |: {3 U& t
- Q% [: C% X2 ^/ n- R$ C, C    这方面研究中，有三篇文献相对比较经典，分别是：" m/ R1 E: B6 n/ ~% a

3 g% F' x/ u8 P4 k' h1. Conti, L., Pollard, S.M., Gorba, T., Reitano, E., Toselli, M., Biella, G., Sun, Y.,Sanzone, S., Ying, Q.L., Cattaneo, E., et al. (2005). Niche-independent- n; _  X6 [* v  A4 r! x2 K9 r
symmetrical self-renewal of a mammalian tissue stem cell. PLoS Biol. 3, e283
8 A" O" q* O. W- h4 p  d9 L9 W. [
# B: G: D5 [: X. c# I/ o2. Pollard, S.M., Conti, L., Sun, Y., Goffredo, D., and Smith, A. (2006). Adherent neural stem (NS) cells from fetal and adult forebrain. Cereb. Cortex 16(Suppl 1), i112–i120.
3 P" j  e0 a- t
+ w# S; `" f) @3. Sun, Y., Pollard, S., Conti, L., Toselli, M., Biella, G., Parkin, G., Willatt, L., Falk, A., Cattaneo, E., and Smith, A. (2008). Long-term tripotent differentiation
: s/ ~0 p, u* O* h+ \4 P4 Hcapacity of human neural stem (NS) cells in adherent culture. Mol. Cell. Neurosci. 38, 245–258.
. ~; f) y$ u0 L: r) d: z* s4 r1 L! |7 S" c# c( J6 E* t+ H
全文PDF版如下，希望对你能有所帮助。
2 h2 A% E; p- s, U% o8 O8 B1.
6 O) t. J3 M6 E7 [1 J: S4 U$ L0 Y* k; }2. ; r1 |, T: O4 i, T4 f" _4 R" S
3.

leedh1223

我想问一下用贴壁培养的方法来培养神经干细胞，从原代取材就开始的吗？还是到后期才换用这种方法的？

leedh1223

还有，贴壁培养干细胞，那它分化的比例高吗？

smkx

回复 6# 深海寂寞鱼 # N* i: ~' R% Z, |

/ u! q. j0 s. v; q; k' A6 Z( p
9 ]) J: e& M* O+ l) W    您真是好人。

深海寂寞鱼

回复 7# leedh1223 " A- [% m, o( X- v5 V5 g

: P6 z/ `# Y; o' E  x, pto leedh1223:
9 g7 E* _0 ?) g9 E   
3 Z- ]6 a* Z; K8 ?( _* f1.     用贴壁方法培养神经干细胞既可以直接从原代取材开始，也可以将你已经养成的神经干细胞换用这种方法。如果是后者的话，你只需要将你的神经球消化后直接接种到包被好的培养瓶/培养皿里即可。1 ]% j: _& A$ l. t

) F# m% h0 j6 L8 w% `* U2.     贴壁培养下的神经干细胞分化的比例不高，如果需要分化的话，根据你想要分化的方向改变培养基就可以了。具体你可以看看我上传的文献。
, v$ {  G; z' o* n* G
, w3 u7 |5 j3 K4 [7 _  Z+ a     如果有问题，咱们可以再讨论。