丝裂霉素C是如何配制和保存的？

qiongyacc

我们实验室采用DMEM配制成2mg/ml，分装成20微升每支后-20避光保存，每次配工作液只用20ml就够了，配多了用不完，放在4°超过2周效果就不好了，一般处理MEF三个小时，含5%FBS的DMEM在培养箱中洗3次，每次5min。
  }9 F- y8 V7 S) H2 T( x这样做的原因是：原来用pbs冲洗5次，到第五次时会有些细胞漂浮起来浪费；当用pbs冲洗只能冲洗掉细胞表面的丝裂霉素C，用这种feeder做es培养后发现es长的很慢（可能是丝裂霉素C残留抑制es生长）；而在培养箱中用含血清的培养基冲洗，放置5min让细胞通过浓度梯度将细胞内残留的丝裂霉素C交换出来，尽量将少残留，这样培养的es增殖速度明显加快，大家不妨试试！$ H7 |, s" I3 @3 \4 z, @
不足之处，敬请指出，相互促进！！

qiongyacc

回复 12# fespysok
( H" s7 a2 l5 q: e6 P  Q
% [9 D, x& u& k/ f5 O可能的原因：$ w+ q0 C! \% G* q+ i7 ]
1.预先要用gelatin铺板，促进feeder贴壁！) W  T" s8 A- J/ F
2.不同批号的丝裂霉素C作用效价不同，要是3小时细胞都不贴避考虑一下是不是因为处理时间太长了细胞死了，可以减少处理的时间，文献上报道是2-3个小时，你可以试试2个半小时或者2个小时，把自己的实验条件定下来再做就顺利了！
- l# @7 Q: \/ Q/ j2 r  v8 {9 } 3.你们单位有钴60当然最好了，用放射处理可以避免丝裂霉素C残留对es的影响！
) W" ]' y" H$ v. W祝好！

qiongyacc

没有做过对照试验，配好分装就冻起来了，用的时候解冻直接用
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