求助：RT-PCR

hyacinthqiqi

大家好！我是新手！
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: I1 i* i  ^, k& M   我设计的实验需要用实时定量PCR检测细胞内某一蛋白的mRNA表达水平，我知道大概步骤是：1 提取总RNA，2 逆转录建立cDNA，3 进行实时定量PCR检测。9 e* T" e* K$ c/ I. @% S
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   但我有几个问题不明白：1 提取总RNA后还要再提取mRNA后再进行逆转录吗？？  
  G. t5 C  `. ?5 [. ?7 ?                         2 这三步都有现成的试剂盒吗？？另外自己还应具备哪些仪器和材料？？
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% J7 P% X: X" h! k2 _* M: T   因为我们实验室小，连基本实验材料都没有，所以都需要自己购买现成的。希望大家帮忙，谢谢！

shewawa

1 不需要。（反正我是没做过，那个mRNA只有4%，要想提取有专用的KIT）
( d' u. O2 H- t3 E- f* b4 Z2 应该都有，反正我都用KIT做的。但是mRNA可以自己调配试剂做（不会）实验器材就是PCR机器，还有incubator

hyacinthqiqi

回复 2# shewawa % G% y$ r$ o& P% S

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0 m4 j: ~: g3 r( @4 p9 s& u    谢谢！！

meilin0118

1.不需要
! l+ z" t; t& e3 w2 l! Y. \* v$ R& L2.步骤是：1 提取总RNA，2 逆转录建立cDNA，
. d0 y3 G$ Z0 T; d" _1 D) e有试剂盒,也可以不用试剂盒.kit里有随机引物和oligo 按照说明书做就行了。用PCR仪。提RNA用的枪头和离心管要处理。买处理好的更省事，只要不差钱就行。