求助：RT-PCR

hyacinthqiqi

大家好！我是新手！
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   我设计的实验需要用实时定量PCR检测细胞内某一蛋白的mRNA表达水平，我知道大概步骤是：1 提取总RNA，2 逆转录建立cDNA，3 进行实时定量PCR检测。7 R* U+ {# k, ?; f0 D2 v/ I
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   但我有几个问题不明白：1 提取总RNA后还要再提取mRNA后再进行逆转录吗？？  
# p, C) @' P3 p6 V* p                         2 这三步都有现成的试剂盒吗？？另外自己还应具备哪些仪器和材料？？, Q+ I6 A+ E$ D* ^0 q  T
               
$ D: h7 u6 M2 h$ \  r   因为我们实验室小，连基本实验材料都没有，所以都需要自己购买现成的。希望大家帮忙，谢谢！

shewawa

1 不需要。（反正我是没做过，那个mRNA只有4%，要想提取有专用的KIT）
1 M$ C: A# w0 c* v' A2 应该都有，反正我都用KIT做的。但是mRNA可以自己调配试剂做（不会）实验器材就是PCR机器，还有incubator

hyacinthqiqi

回复 2# shewawa
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8 H: ~0 y' F" |0 ]% O" Y
0 k. B% B3 ?, E& A4 x    谢谢！！

meilin0118

1.不需要
2 J  r# ?, u4 c2 m2.步骤是：1 提取总RNA，2 逆转录建立cDNA，
3 U  L7 C4 w5 D/ `% [: s4 M& r* F有试剂盒,也可以不用试剂盒.kit里有随机引物和oligo 按照说明书做就行了。用PCR仪。提RNA用的枪头和离心管要处理。买处理好的更省事，只要不差钱就行。