为什么我养的神经干细胞贴壁的很少呢？

superlamp

材料：采用24h新生鼠的全脑
  d. k! U1 j8 P培养基 DMEM/F12 bFGF EGF LG 双抗 B27
5 n, W. T  p/ S* G: w3 O增殖期还不错$ u) h  u0 n) y( ?
分化时培养基：DMEM/F12 胎牛血清 N2 双抗
4 g& o% G1 f3 i* u4 T! t& G' @+ m分化后第一次换液，可见少量细胞球，细胞数量有减少，第二次换液时细胞数量骤减，且贴壁的细胞数量更少，仍能见未贴壁的神经球，收集细胞时发现贴壁的神干仍然很少。6 x8 Y: U1 E& R% G2 O( a; N: ^, T
以前做的时候没有出现过这种问题
: j9 s9 p, A3 X! G怀疑是血清的问题，可是这次用的血清是刚买到，刚分装好的: u$ W( u, M0 X
希望共同讨论一下其中的问题

guosapphire

你使用的培养皿有没有换？不同的培养皿贴壁能力也有所差异。+ e  v2 O* g. D1 A3 c3 T/ J
血清你们使用的有批号记录吗?有的话可以核对一下是不是血清批号变了。
9 F& \3 a: u0 w9 d可以使用laminin包被培养皿使其贴壁，不过有点贵，也可以使用poly-l-lysine 包被，不过效果会差点。

superlamp

培养皿没有换过，血清确实是新换的，不过也不至于这么差吧，还新的呢  r) F( K  L( T* X' s4 l  w
个人也觉得是血清问题
, _( F" ]; X( f$ T" U( F  x7 n不过现在有部分贴壁了，难道要刮下来重新贴壁嘛？

junjunxu

1 用的是全脑材料是否影响到神经干细胞的数量；海马，室管膜下区认为含有丰富的干细胞；
" X  ]) }+ ~+ X- Y, F2 贴壁的细胞中也有神经干细胞；
8 q; B0 z# _( @* ?$ E/ G3 消化组织用的酶是哪类？酶也会有影响

SVZ

请问你增殖期培养用的培养皿和贴壁培养用的是一样的吗？我用的增殖期培养皿是未处理过的，而贴壁培养用的是处理过的。处理过的易于贴壁，皿的质量好坏对贴壁影响也很大。
9 r' ]9 m5 z; B' d8 P8 f% ~" N' C: y, J& A+ o* h
我个人认为，你的细胞是经过增殖培养的，而且你说过还不错，而且你是用的神经球贴壁培养，所以我认为应该不是细胞数量的问题。

superlamp

回复 5# SVZ 6 y& v% n: H+ \6 \3 g- o6 ^+ y' g

. j1 B' @3 n, `6 T/ y) D; v% t. y/ ]' _* H) a
    问题可能就是出来分化期的培养皿上了，虽然是进口的，但没有用多聚包被过，虽然原来也没有包被过也贴壁良好，但这次可能还是因为某些原因未能正常贴壁，所以我觉得下次再养的时我还是用多聚包被一下比较稳妥些，谢谢了

jennyshy

用多聚赖氨酸包被吧8 ?- p; @1 S* w
不包被也可以贴壁分化，不过效果不够好