为什么我养的神经干细胞贴壁的很少呢？

superlamp

材料：采用24h新生鼠的全脑2 L! A0 `1 w! \8 P4 v
培养基 DMEM/F12 bFGF EGF LG 双抗 B27
5 p6 K7 a& m) z; I( y/ r+ W增殖期还不错
# k, o$ P1 }  }) r5 b分化时培养基：DMEM/F12 胎牛血清 N2 双抗
. X- E; ]. P" b* M" a分化后第一次换液，可见少量细胞球，细胞数量有减少，第二次换液时细胞数量骤减，且贴壁的细胞数量更少，仍能见未贴壁的神经球，收集细胞时发现贴壁的神干仍然很少。# I+ }  J9 q9 L
以前做的时候没有出现过这种问题* K6 N# v9 J4 N) v
怀疑是血清的问题，可是这次用的血清是刚买到，刚分装好的1 u8 Z* Y( G2 N( z, f9 z  u
希望共同讨论一下其中的问题

guosapphire

你使用的培养皿有没有换？不同的培养皿贴壁能力也有所差异。
; d3 p; w2 e. g: ~* U( H- R2 G血清你们使用的有批号记录吗?有的话可以核对一下是不是血清批号变了。
4 `- [; G) ~( v& }1 B2 i, l可以使用laminin包被培养皿使其贴壁，不过有点贵，也可以使用poly-l-lysine 包被，不过效果会差点。

superlamp

培养皿没有换过，血清确实是新换的，不过也不至于这么差吧，还新的呢
( S- o( `. ^$ q4 I0 L+ h个人也觉得是血清问题, `; M" S8 u' F  ]- ?+ }0 r$ l
不过现在有部分贴壁了，难道要刮下来重新贴壁嘛？

junjunxu

1 用的是全脑材料是否影响到神经干细胞的数量；海马，室管膜下区认为含有丰富的干细胞；( Z' A! d2 y" }8 R( v* W
2 贴壁的细胞中也有神经干细胞；
" w- m8 H' i0 [- p; G3 消化组织用的酶是哪类？酶也会有影响

SVZ

请问你增殖期培养用的培养皿和贴壁培养用的是一样的吗？我用的增殖期培养皿是未处理过的，而贴壁培养用的是处理过的。处理过的易于贴壁，皿的质量好坏对贴壁影响也很大。; u, @7 ]8 t2 w; u! ~/ r

# n3 l% n( \/ o, L8 [! w6 p2 L我个人认为，你的细胞是经过增殖培养的，而且你说过还不错，而且你是用的神经球贴壁培养，所以我认为应该不是细胞数量的问题。

superlamp

回复 5# SVZ
) ^7 S) P" C8 u! {5 `- X; _( f
" k# J% T8 E! R/ a9 \8 N% j  Y: N8 Z! R4 ?" R8 T5 d3 A
    问题可能就是出来分化期的培养皿上了，虽然是进口的，但没有用多聚包被过，虽然原来也没有包被过也贴壁良好，但这次可能还是因为某些原因未能正常贴壁，所以我觉得下次再养的时我还是用多聚包被一下比较稳妥些，谢谢了

jennyshy

用多聚赖氨酸包被吧
7 B) D5 c0 g! V3 s+ V! D$ N5 i( |不包被也可以贴壁分化，不过效果不够好