请教：神经球免疫组化protocol

smkx

哪位高手可以贡献下神经球免疫组化protocol参考下，非常感谢！

yuerenxi

有没有找到，我也想要这个东东呢

xiaodiao123

我也想知道

jennyshy

1.0.1mg/mL 多聚赖氨酸（PLL）包被培养皿 37℃ 至少3h(最多2d).
6 M8 P+ Q' N8 |. v0 M2.弃PLL，晾干后PBS洗三次，晾干
7 d7 Q5 _8 {0 N& s3.种入神经球，完全培养基（若贴壁效果不好，可以稍微加0.5%FBS）培养箱内放置约3h至神经球贴壁不动
, h0 f1 t9 ]; H0 j" F8 |& I4.免疫细胞化学步骤开始：弃培养基，PBS轻轻冲洗2次，加4%多聚甲醛（PFA）室温固定20min
+ F3 j! f5 q$ T( z4 G; Y5.弃PFA，用PBS 置换PFA，每次5min,3次- g" Y9 q$ ?5 s( a& E1 f! }7 C: t
6.PBS加1%Triton X-100透化20min，PBST(PBS加0.05%Tween 20) 洗三次每次5min
, m: s* c: e* c7.10%BSA （PBST配）室温封闭1h
$ Q4 E7 ]# Y* _8.1%BSA（PBST配）加一抗，室温2-3h或者4℃过夜6 b$ q# K. s) C, f9 Y4 y7 k9 e
9.弃一抗（可回收一次使用），PBST洗3次，每次5min
2 ]* `  r* j6 B" e+ E3 Y10.1%BSA（PBST配）加二抗，避光，室温2-3h或者4℃过夜
' p- N+ e1 N* R: V9 y. G. z8 v11.弃二抗（可回收一次使用），PBST洗1次，5min后PBS洗2次，每次5min，避光. ], T6 Z' l  V  r  B, o( F3 Q4 h
12.1:5000-1:10000加DAPI染细胞核5min，避光，注意DAPI不溶于PBST# x7 y$ m" G. s4 D5 r) N8 `
13.弃DAPI后PBS轻轻冲洗2次，培养皿内加适量覆盖培养皿的PBS后看荧光
# Z( \$ Z* i, p" h3 Y
) \3 w: l" D& X/ V7 |6 r, Z2 }+ G注意：1.整个过程，尤其PFA固定前不要距离晃动，避免神经球脱落。固定后即可在摇床上来回晃动
. S9 X2 [  ^- l; N9 M& s* C  t      2.避免培养皿变干
& q! r$ B, G; _      3.PBST，透化试剂最好新鲜配，试剂长毛会导致荧光看不到

jennyshy

这是我一直用的步骤

iseeyou1210

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4 V  `8 A# ^! L3 n& ]- v  H8 ~( g
2 H2 j7 T. ]6 J( A. W. qhave you tried to section the neurosphere?

jennyshy

sure

xfyang2007123

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$ ^0 q0 J" c8 w- a: g+ I. b  C3 n  w
感谢。