 
- 积分
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- 威望
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- 包包
- 771
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1.0.1mg/mL 多聚赖氨酸(PLL)包被培养皿 37℃ 至少3h(最多2d).
6 M8 P+ Q' N8 |. v0 M2.弃PLL,晾干后PBS洗三次,晾干
7 d7 Q5 _8 {0 N& s3.种入神经球,完全培养基(若贴壁效果不好,可以稍微加0.5%FBS)培养箱内放置约3h至神经球贴壁不动
, h0 f1 t9 ]; H0 j" F8 |& I4.免疫细胞化学步骤开始:弃培养基,PBS轻轻冲洗2次,加4%多聚甲醛(PFA)室温固定20min
+ F3 j! f5 q$ T( z4 G; Y5.弃PFA,用PBS 置换PFA,每次5min,3次- g" Y9 q$ ?5 s( a& E1 f! }7 C: t
6.PBS加1%Triton X-100透化20min,PBST(PBS加0.05%Tween 20) 洗三次每次5min
, m: s* c: e* c7.10%BSA (PBST配)室温封闭1h
$ Q4 E7 ]# Y* _8.1%BSA(PBST配)加一抗,室温2-3h或者4℃过夜6 b$ q# K. s) C, f9 Y4 y7 k9 e
9.弃一抗(可回收一次使用),PBST洗3次,每次5min
2 ]* ` r* j6 B" e+ E3 Y10.1%BSA(PBST配)加二抗,避光,室温2-3h或者4℃过夜
' p- N+ e1 N* R: V9 y. G. z8 v11.弃二抗(可回收一次使用),PBST洗1次,5min后PBS洗2次,每次5min,避光. ], T6 Z' l V r B, o( F3 Q4 h
12.1:5000-1:10000加DAPI染细胞核5min,避光,注意DAPI不溶于PBST# x7 y$ m" G. s4 D5 r) N8 `
13.弃DAPI后PBS轻轻冲洗2次,培养皿内加适量覆盖培养皿的PBS后看荧光
# Z( \$ Z* i, p" h3 Y
) \3 w: l" D& X/ V7 |6 r, Z2 }+ G注意:1.整个过程,尤其PFA固定前不要距离晃动,避免神经球脱落。固定后即可在摇床上来回晃动
. S9 X2 [ ^- l; N9 M& s* C t 2.避免培养皿变干
& q! r$ B, G; _ 3.PBST,透化试剂最好新鲜配,试剂长毛会导致荧光看不到 |
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