神经干细胞传代

平平淡淡

神经干细胞怎么传代？能传多少代？

细胞海洋

http://www.stemcell8.cn/viewthre ... 0%FB%2B%B4%AB%B4%FA

平平淡淡

我养神经干细胞几个月了，每次原代形成的球都还行，可是一传代球就很难长起来了，也不知道为什么。麻烦大家指导一下，谢谢！

xiaodiao123

回复 3# 平平淡淡 2 |" r$ E  S, W7 H" c& a1 o

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   原理上不应该。首先你先保证培养过程中培养基没有发生变化；其次，你在传代吹打的时候不要把球都吹成单个细胞，可以尝试着把球先吹小，然后再看一下培养的效果如何？其实我每次传代的时候是这样的，但就算偶尔吹成单个细胞，也并未出现你所说的现象，可以尝试着再找找其他的原因。比如说，哪家公司的培养基、因子等，是否会导致细胞的衰老。

平平淡淡

谢谢!我的培养基应该没问题，可能是吹的太散了。

平平淡淡

把球吹小后然后一分二再培养吗？请问你已经传多少代了？

xiaodiao123

回复 6# 平平淡淡
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6 J3 G$ Z$ Q0 h9 q; u' p3 _" l0 ?
  s( a! x) T! o6 n7 L* L   对，我传代一般是1：2的传。我一般最多传四、五代吧，然后就利用了。

平平淡淡

哦，谢谢。我大概也是要四代以后的用来做实验。再请教一个让我苦恼的问题，我想诱导分化神经干细胞，接种到六孔板做。那我是用传代后神经球直接接种诱导呢还是把神经球吹散了再接种诱导分化？吹散了细胞可以计数可以调接种密度，但是神经球怎么计数并调接种密度？

dingyx2009

回复 6# 平平淡淡
3 |: @, W. t4 @9 ]# [' c我认为干细胞的传代应该是将神经球消化，吹打成单细胞，然后是增殖分裂再聚球。试想一下大的神经球，机械吹打成小的神经球，这部分的神经球是没有传代的，并且吹成的单细胞和没吹散的神经球最终形成的细胞球大小很不一，根本没法做免疫染色的。

dingyx2009

回复 3# 平平淡淡
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我也养神经干细胞，你或许需要从一下几个方面排除：
) ?# @0 v/ Y; E! g! Z; v6 O1.传代你用单纯的机械消化法，还是胰酶加机械消化法？单纯的机械吹打消化法，细胞很难成单细胞。我现在多用0.25％胰酶加0.04％的EDTA，消化25－30分钟，立即终止消化，离心后漂洗2遍，再加培养基吹打15次左右，基本都成单细胞，你可以试试，加胰酶加EDTA很好用的。
% \0 v" B$ W4 R4 t' a2.干细胞的生长也还是有个密度依赖，细胞密度不够长的也不好，如果你感觉细胞多可以一传三，不过多数都以1：2的比例，应该没问题的。