碱性磷酸酶染色

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AKP染色具体步骤：
2 J$ j, y/ l$ K. b3 _# E(1).        配制AKP缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl，PH 9.5，50 mmol/L MgCl2，0.1% Tween-20）。/ q) z7 J' ^) K0 s( e
(2).        从培养箱中取出生长5~6天的hESCs，弃去旧液，PBS洗两遍，加入含7.5%蔗糖的1%多聚甲醛室温下固定30 min。1 N* W; a1 y+ h9 g4 u" g
(3).        AKP缓冲液洗涤3次×10 min。% S" [% l- x& i# i1 {& N4 T: D0 E
(4).        配制新鲜的AKP染液：分别取45 μl NBT（nitroblue tetrazolium）染液和35 μl BICP（5-bromo-4-chloro-3-indolyphophate toluidinium）染液溶于10 mL AKP缓冲液中。
' C+ R' c1 a: Z7 M3 b0 x(5).        加入染液，室温避光作用约20 min，自来水显色，显微镜下观察。
4 x( w  I" @9 M+ L# ~0 h& v