求助小鼠骨髓间充质干细胞分离方法

若兰汀

求助小鼠骨髓间充质干细胞分离方法
* E& x! c. s2 I/ R1 c, l- K8 w; n因本人自己进行过一次分离，遇到的问题如下：
) `+ ^. u7 J5 Z- z1.分离后4小时，培养基中看到一些模糊的团块，是凝固的骨髓块还是血块不详；
9 v7 S7 _, _+ G; i) u2.细胞3天后换液，形态学观察间充质细胞数量极少；
( c1 S) A4 |: }* g1 B! x2 Q3.6天后观察，细胞生长缓慢，基本未见增殖，无法传代。
5 }! L1 W7 j3 H请教以下问题：
; B2 m9 o' E& r- {1.如何去除凝固血块或骨髓块；- W* q7 q' O2 {5 @* u% d& O
2.如何将MSC与造血干细胞，成纤维细胞等最大限度的分离纯化，因为需要进行后期诱导。% W* a* `/ d  b# ~
拜托分离过的高手指教一二，谢谢！

dongleizhang

全髓种植，三天换一次液，等上清澄清，贴壁细胞就是

lchanlon

去除血块和骨髓块可以在骨髓充下后，用70um的网筛去除，然后再加入培养液培养。如果有流式的话可以用Marker分选一下。这样能提高纯度。

痞子的烟头

或可以差速贴壁纯化

若兰汀

回复 2# dongleizhang
6 f8 ]6 G9 G8 J/ G# u6 _7 H9 c
- `, L! A, _: l" b. G* Z) p1 V% d
8 ?$ f! G) b) h! H% ~    不会有成纤维细胞干扰？很多人也提到成纤维细胞还有巨噬细胞等贴壁是比MSC要牢的，那我消化时候控制的时间就很关键了。

若兰汀

回复 4# 痞子的烟头
: D0 w- Z( I: `% ]- d4 ]
# x" H5 C  a% V6 v+ \% F9 Q- T  M) l2 X
    谢谢啊，那么差速离心转速控制室多少呢？要放在什么介质中去离心呢？ficoll吗？

若兰汀

回复 3# lchanlon
3 L2 c* q; h1 ~' p9 c/ \, Y* y4 W7 F2 B) D& e0 G
, O; L* I/ d$ e
    谢谢

若兰汀

回复 2# dongleizhang 6 _* u" g1 e' _$ z. w" r

' ?" w* Y8 K& ?+ }
7 |0 s* X: N: \- o) E! Q    一般等到筛选结束，大概要多少天呢？

dongleizhang

回复 8# 若兰汀
1 z$ Y+ V, [9 g* O: T
* N/ ^1 W: W8 z' N6 X4 Z0 M( V0 l- J6 x! F+ [% a
    具体上是每三天换次液，一周之后会澄清，然后接着培养的话你继续换液，等到贴壁confluence的时候，消化下来你可以检测下表型，应该差不多的

若兰汀

回复 9# dongleizhang
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    谢谢