胰酶消化传代需要注意什么问题？

mhy1982

25cm2的瓶我一般加0.5ml的0.25%的胰酶就可以了，胰酶用前要在37℃下水浴，保证效果。消化前细胞要用PBS洗2遍，然后加入胰酶，这时如果细胞的代数比较靠前，可以在显微镜下观察，细胞很快变圆，这时就可以轻轻震荡拍打养瓶，见细胞大部分离开瓶底，就可以加入培养基终止消化，如果细胞代数靠后，不太容易消化，就放在培养箱1-3分钟，然后观察到细胞变圆就可以终止消化。我一般不离心，加入的培养基量远远大于胰酶量就可以等细胞贴壁后换液。也可以离心后重悬然后接种。