支原体检测有什么好的方法？

zb_ming

大家都知道，ipsc最怕污染，尤其是支原体感染不易发觉，大家有什么好的办法去鉴定细胞是否被支原体污染，敬请指教。

zerollx

1、电镜检测
5 v% q6 t4 [% z9 d( H+ s  R. b& }9 \+ p( j
2、利用荧光染料（Hoechst33258）检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T福集区域，因为支原体的DNA中A-T含量高（55%-80%），所以可将其染色而检测
2 u5 P/ Y* H$ v8 X3、试剂盒诊断:我用过杰美细胞支原体检测PCR扩增试剂盒，很方便的[img][/img]

shihuijunm

国内有单位检测的 需要支付一定费用 北京干细胞库提供这项服务 用的就是pcr分子鉴定，肉汤培养法检测及hoechst染色这三种方法。

michao111

一般公司用的是分子杂交的方法和微生物的方法，这都是国家要求的方法，灵敏度还可以，但是没有 PCR检测好。
9 W: X- O2 C0 z7 n% J9 a, |6 G9 i4 F. e1 W
PCR一般的实验室都有，用PCR检测很好的，现在检测支原体的试剂盒国内国外的都有，拿来直接做，简便快捷， 如果你的经费多的话 就用国外的。

woaiIPS

支原体检测一般有四种& Y3 o: P% z1 ]5 h, K2 w+ Y! q
1 支原体荧光检染色 培养物用Hotchst 33258 原理与DNA特异结合 因此将培养细胞固定染色后 观察细胞核外是否有荧光即可
# a$ H1 U; R7 h) v8 Y& o2 PCR检测 一般是德国公司的试剂盒 Braunschweing DSMZ
1 z. [; B" p& t8 ]2 K# @- [3 微生物培养 这样方法缺点不许有养活的支原体做阳性对照 而且还需要微生物背景知识1 U# C& J( M1 s( @2 ~9 x# E, h6 f
4：分子杂交 建议不用这方法。

heather_lu

除了用VERO细胞做Hochest染色外，直接染培养细胞也可以吗？

简简单单

我也做过hochest染色，但是不怎么会看。有没染过阳性的图片，上传一张参考参考谢谢哈！

qizhi502

可以pcr分子鉴定，或者肉汤培养法检测，再者是hoechst染色

zb_ming

大家有没有自己的经验呢？

懵懂干细胞

貌似有支原体攻克试剂盒哦！可以考虑考虑！