细胞生长不好的影响因素都有什么啊?

gaorongbest

    最近,做细胞的同学细胞状态都不是很好,基本都是原代就开始不好了,大家用的都是相同的培养基,PBS,胰酶等,细胞间的环境都一样,但是做的是不同的原代细胞,有上皮,成纤维,软骨等,但是做的原代都是一样的状态 : 1.细胞不贴壁/贴壁不伸展;2.细胞生长的特别慢,形态也不好看3.细胞生长几天后自己就死了或者破碎了;# x& f( L% d" D- u/ `9 ]7 z
    不知道是配液有问题还是环境太干燥了,或者是气候的影响,大家都很纳闷,希望各位能给点建议,帮助我们解决这个问题,谢谢啦!

Chunjieliu

原代培养本身的难度较大，存在细胞生长周期长，生长缓慢，容易发生污染等风险。所以，在做原代培养之前，应将培养箱和用具重新灭菌，一次性器具和培养基血清等尽量用新的，而且用进口的血清效果可能会更好。其次在操作过程中，应严格按照无菌操作要求进行，尽量避免细菌、支原体污染。我们实验室以前做过上皮细胞的原代培养，刚开始总是出现霉菌污染，后来将培养箱重新灭菌并采用了专业培养箱，才避免了污染。

亮亮燕燕

我们实验室也出现了类似的情况，大家上面说的各种可能性我们也都考虑了。但是还是不太好。我们准备把细胞培养室彻底打扫下，消毒一下！用的东西也换新的。不管是不是这个原因？至少放心了！本来细胞室就应该定期消毒的！

xuehu20

既然大家培养的细胞都出现这么样的问题，应该是大家共同使用的一些实验用品的问题：
' B/ w& x9 f+ l1）看看配置培养基用的超纯水有没有问题，或者是超纯水机；; m0 A9 N- V0 _+ b
2）配置培养基用的干粉是不是有一定的质量问题；! M( T& y5 @8 N+ I
3）大家使用的实验用耗材，如培养用的瓶子是不是有问题；3 l1 V/ ]- x  A) r0 E
4）再就是看看实验室培养箱了，是不是屏显与实际的温度、湿度和二氧化碳浓度不相符，或者在使用期间有大的波动之类。

gaorongbest

回复 zxdlala 的帖子
/ Z6 B- F  J, l  w% S1 \7 t6 @; Z6 G; s9 R. O* U3 w7 I3 I
胰酶是消化表皮的，胶原酶是消化间充质的，胰酶可以用血清终止消化，而胶原酶只能最大稀释，用血清不能终止消化

gaorongbest

回复 shuishanglingzi 的帖子
- T- p0 f: C% X9 S$ e" c! R& m+ b9 q. V" U2 R$ r7 z
我还不知道过滤也改变pH值呢，现在长见识了，放久了会升这个我知道，呵呵。

kastanie

也可以查查看是不是刚换了血清呢？我们曾经用国产的血清，恰好换了一个批号之后同样的细胞生长状况差很多很多。

64627675

这个问题有点麻烦，很多海归从国外回来经常说，我在国外做的蛮好的，怎么一到国内的实验室就常出问题，个人经验分享，如果是自己配的培养基，水是很重要很重要的，再就是PH值，为了避免这个问题，建议购买现成的培养基，这些问题自然就不存在了，那么剩下的就是血清了，血清尽可能买个进口的，再有问题的话，那就去找胰酶双抗之类的因素了，一般很少是培养箱的问题，培养箱要是有问题的话，那细胞应该很快就会污染死亡的

joeandanna

实验室和培养箱温度是否需要校准？ 再有培养箱内湿度是否合适？还有不能频繁打开培养箱。不要频繁挪动培养瓶。 注意无菌操作。

zxdlala

胰酶和胶原酶的差别到底有多大啊？