我的细胞为什么老出这种状况啊

wudai

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我昨天下午取的胎鼠脑皮质神经干细胞，显微镜下分离、机械分离、胰酶分离、过200目筛子，加培养基（DMEM/F12+B27+bFGF+双抗）分两瓶装。取完在显微镜下看着细胞数量和形态蛮好，放入培养箱。今天早上去看，一瓶培养基颜色正常，无浑浊，于是取出观察，形态正常，部分细胞3-5个聚集成团，少量散在分布，采像。观察另一瓶，培养液偏黄，表面浮着一层白膜，细胞都在膜上，周围只有散在的单细胞。准备把培养瓶重新放回培养箱，这个时侯就很悲剧地发现那瓶看起来蛮好的细胞培养液上层也出现了肉眼可见的一层膜，显微镜下看那些细胞都在膜上，这时培养液颜色仍然很正常。这种情况已经发生三次了，前两批细胞也都是取材第二天就出现白膜。哪位能告诉我这是怎么回事吗？难道又要扔掉？
  y8 _  @0 V" x0 a这是当时的图片
- F2 y3 B+ Z4 N" H6 P这是后来出现白膜的图片，这个是膜的边缘

平平淡淡

不是太清楚，我养胎鼠神经干好几个月了，原代没出现这种情况，都挺好的，就是传代后细胞老不行。郁闷！！

wudai

这都是连续第三批出现白膜的细胞了，我的培养基、生长因子、添加剂什么的都换了新的，也很注意无菌操作了，不明白为什么老出这种状况。细胞养不出来，实验就没办法继续，急死了。都打算买细胞株了，可是太贵，只好自己养，实验做不出来，毕不了业怎么办啊！！

tingwuyu

你可以先做下无菌检测，重点是真菌检测，因为真菌检测培养液颜色刚开始是不会变色的。若排除了污染，则我想会不会是因为你做原代培养过程中细胞死亡过多，释放的DNA和蛋白质缠绕将细胞网住。图片看不清楚，只能按常理猜测了。

267318024

是不是要清洗培养箱了！！！

wudai

谢谢各位，培养箱才清理过，里面还有别人的其他细胞，长的一直很好，应该不是培养箱的问题。不过那个无菌检查怎么做啊？

tingwuyu

买几个营养琼脂平板，划平板，这个是最简单的法子，你可以试试。一般的细菌都可以检测到，真菌的话也可以用专门培养真菌的平板来培养检测