急！急！急！跪求各路高手帮忙！神经细胞莫名其妙死亡？！

tk1504008

我养的是新生大鼠（24h）的海马神经元，取海马后，剪碎，0.25%胰酶消化20min，含血清培养基终止消化，1000rpm离心10min,弃上清，用无血清培养基+0.2%B27培养，每个皿2ml，24h后全量换液，每隔3天半量换液。
, ~  P6 S7 ^3 |前四天神经细胞球都还长得好好的，第四天半量换液后也好好的，但是过夜培养后，细胞大量死亡，显微镜下观察，有很多碎片，感觉似乎很多细胞都凋亡、裂解了，幸存的细胞体积明显变小，不知道是为什么?
  \# t# C2 s; v$ r半年后就要毕业了，养不出来细胞，就不能发论文，不能发论文就不能毕业，怎么办啊！！！！! Z2 F& v7 R+ f; @& C" i. g% k0 Y
求求各位高手，大神帮帮我吧！！

zb_ming

一般来说，细胞在接种后第二、三天时是死亡高峰期，根据你提供的方法，个人感觉：
+ _, t2 ^- X1 U1 `4 C1、胰酶消化缩短至10-15分钟，毕竟对细胞伤害不小；/ ]( c0 L5 d# Z; O) o! L- D
2、也可以用EDTA试试，比较温和，如果消化效果不好，就两者结合，这个用的比较多，相关资料也多；* d6 B$ D5 O/ H! b, @
3、离心建议1500rpm5分钟，尽量减少细胞损伤时间，离心效果也不错，可以试试；
# Z! t4 K  G3 d5 H4 V' M4、如果细胞第四天死亡还多，建议尽早传代试试，毕竟死亡细胞释放的有害物质也可能伤害细胞。+ [* k6 j) p: P0 m0 n
以上是个人经验，仅供参考！希望楼主顺利毕业！

tk1504008

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/ U7 L/ f) S" `6 q/ \1 D7 Q: \* e9 P4 f
万分感谢！！！！
4 F" t& ?& m- O4 _8 j# W, Q% ^" E# P我马上试试！！

ngu3314

细胞密度是多少？如果密度太高的话当然养不久，密度太低的话也无法正常发育生长。

禁林秋木

不要用胰酶消化，使用Accutase消化，这种酶被广泛用来消化神经干细胞。对细胞的损伤最小