今天驯化了一下ES细胞～

wangzhuo822001

     mES在饲养层细胞上养了两代后，将细胞消化下来，没有经过差速贴壁，也没有经过其他的纯化方法，直接将混合有MEF和ES的细胞悬液种到铺有明胶的细胞培养皿上，培养18-36小时后，换液发现里面培养基比较浑浊里面有很多死细胞团，请问各位是否也有这样的现象呢？？这些死细胞是mef吗？因为我觉得mef应该是和es一起贴壁才对，所以不明白这么些死细胞是什么东西～～
% e: C8 s- \+ D% J有一篇文献里面提到： 饲养层的去除方法为从冻存状态复苏小 鼠胚胎干细胞，在饲养层上 培养 2   d左右。然后用胰酶消化下来，传代( 1 ： 3 ～ 1 ： 5 )  至只铺有明胶的器皿上，完全培养液培养 1 8 ～ 3 6   h ，  即可去除饲养层细胞的干扰。 想知道这种方法怎么能去除mef呢？mef不是应该和es一起贴壁生长了？？

wangzhuo822001

回复 huanmiao2005 的帖子0 P" a+ [  `9 T. \% _9 a" H

; |- Y8 `$ p/ d) z# d5 {今天是第二天，发现不管是明胶板子还是无明胶板子，ES细胞都死了～～不知道怎么回事？？

huanmiao2005

我也试过 我消化完之后 差速贴壁纯化了 种到铺了明胶的板上 也是细胞有棱角 但没有成团 2 d( u: V! `" U
我也做了碱性磷酸酶染色 但没着色 不知道是不是做错了 原来没做过染色的

wangzhuo822001

回复 cony 的帖子
1 j; |0 U( v$ X2 q
) m" q; V$ ?1 O7 ~3 ^    还有就是 我试了两种驯化方法，一个是如前所诉的mef和es混合液种在铺明胶的板子上，一个是铺在没有明胶的板子上。培养24小时后的今天换液就发现有很大的不同， 铺明胶的板子，把培养基倒掉后，能看见有棱角的ES细胞，但是基本看不见mef；没有铺明胶的板子，培养基换掉后 ，ES细胞被换掉好多，但是能看见部分贴壁的mef。$ e& t# U) P) T9 V' Y
    是不是铺明胶的ES是长在mef上 所以mef被掩盖了？& P1 x8 g! {$ Y2 Z) p3 ~
    没有铺明胶的细胞培养皿，ES就不容易贴壁，以致我一换液就换掉了？？
& L5 j1 O2 L2 }; c  T; p

wangzhuo822001

回复 cony 的帖子; X+ K8 o( p) L  x: h% h

" D% e- C! @! t% Z2 o话说和我观察到的ES细胞真的很像，就是有棱角。但是显微镜下看到的细胞团块比较大、黑、松散、形状不规则，是不是 ES细胞团长得比较快，而里面又参杂了mef或者没有参杂，所以形成了那样子呢？？

cony

MEF不会形成细胞团，那些应该是消化时没有充分吹打散的ES细胞团块。MEF跟ES一起接种的话，我也试过几次，问题不是很大，MEF先贴壁，扩展开，ES才会贴壁生长，这样的结果是ES克隆团在表观上看起来没那么的圆，会有点棱角

wangzhuo822001

第一段 确实是在驯化ES细胞过程，今天换液，明天继续观察～～

have-a-rest

标题很有噱头哦！