脐带干细胞的分离

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各位高手,我最近开始的取脐带干细胞,我的方法是:
, {8 E: E3 _, J  G* b* r& `1.将脐带中的血管挑除
* h1 T7 m( P. O- |2.用眼科剪剪成碎片
) m- T$ u/ f' l4 _: r' E$ k3.放在10倍左右体积的0.1%的2型胶原酶中37度消化半小时(震荡),我没用胰酶,因为感觉胰酶对细胞的损伤大" ?# D8 i" ]& o4 _8 u
4.稀释3倍后1600rps离心10min
/ W7 d* A: \: _0 _5.冲洗后再次1500rps离心8min! G% Y$ ?0 M0 ~2 n6 U6 u) @
6.然后过筛网,此时感觉液体仍然很粘稠...直接放培养瓶中培养& v9 M4 a, }2 l% Q7 ^

9 Y+ q' Y. n# O* o操作完后直接镜下观察结果发现没有细胞,这是怎么回事?我哪个环节出了问题,谢谢指点