请教大家谁可以提供c-kit、Sca-1等鉴定干细胞的操作步骤

laoxuejiu

请教大家谁可以提供c-kit、Sca-1等鉴定干细胞的操作步骤？？？
6 r! j2 ]4 Z5 l细胞总算养活了，可是接下来是不是还要分离？？我看大多文献分离是免疫磁珠，看着头大，呵呵; U7 X8 p9 `  s6 L+ k
鉴定？？的话，这些表面抗原操作的步骤是什么，大家懂的最好详细点，谢谢了！！！

starlancer

回复 laoxuejiu 的帖子1 n) m& z" l, L6 [/ n# @* j' j7 n

# Z& M- L9 ~, q8 \  ^5 }  f; v/ s根据你的描述，我感觉你可能对课题还理解的不是很透彻，至少对如何鉴定、研究干细胞还不了解。首先，仅仅通过几个表面抗原来鉴定干细胞是远远不够，其次，你说细胞养活了，然后要分离是什么意思？你是说纯化吗？看样子像是你进行了原代细胞的分离培养，然后向进行纯化和鉴定，是不是这个意思？如果是，那么你要进行纯化，通常纯化的方法有macs和facs，前者就是磁珠分选，后者就是流式细胞，根据细胞的类型你自己选择marker吧。至于如何鉴定表面抗原，你做免疫荧光细胞化学吧，protocol自己去找吧，或者找你师兄、老板要。

laoxuejiu

谢谢楼上兄弟的解答，我做心脏干细胞，但是根据文献的做法，我怎么怀疑是养原代细胞呢，这原代和干细胞毕竟有差别吧，怎么从三种细胞中“纯化”？还是叫分离？出心脏干细胞来？谢谢您

starlancer

回复 laoxuejiu 的帖子  O9 L0 K) T6 M) o4 D9 j, ^

& _; }# y' U1 O; H6 K8 q$ I原代细胞是指从组织新分离出来的细胞，往往是多种细胞的混合物，需要进行purification从而筛选出你要的细胞，干细胞也是从原代细胞中分离纯化后，经过长期体外培养并鉴定而得来的。2 |( l0 o4 [9 |4 w2 _- p
既然你要分离，就要按我上面说的，用macs或者facs法进行纯化，具体用什么marker你查阅文献吧。

laoxuejiu

谢谢楼上的各位兄弟