请教关于B27无血清体系中FGF2添加的问题

esc123esc

我是先用FBS+DMEM养了原代，然后换成用B27+Nuerobasal的无血清培养基养的，但是没有加FGF2，但是我觉得细胞增殖没有在FBS里面快，几乎不怎么长了，我想请问一下，如果在无血清环境下不加FGF2会有很大影响吗？

nobelmao

当然了，无血清体系中没有血清中的多种生长因子就要额外添加啊，没有的话当然不会增殖生长了

leedh1223

一般培养NSC的无血清培养体系中除了添加bFGF和B27外,一般还有EGF的

echo13032619

但是 NSC 接触到血清以后很容易分化，一般都是要用无血清的。 我自己养的传代NSC 都是b27和bfgf ，复苏后第三天一般就要传代

jennyshy

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请教你NSCs 冻存和复苏的方法，我复苏的效率不高，死亡细胞较多
+ i7 W7 @% I0 [# u4 V: ]2 g不知道你的方法如何

echo13032619

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复苏的时候一定要注意，解冻时一定要快，我是在37度水浴解冻，然后加入vital中等体积的完全培养基（比如vital中0.5ml，我就再添加0.5ml培养基），但是滴加时很慢，一滴一滴的加进去，然后静止1min左右，然后缓慢吹打均匀，然后将悬液转入已装有4ml培养基的tube 里面，离心，开始的离心力200g 3min（水平离心机）  基本可以将细胞全部离下来

echo13032619

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! T  Z" _! x- I* v7 C% C% Q1 `# A弃掉上清液，加入培养基重悬即可，第二天几乎没有换液

jennyshy

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谢谢。

jennyshy

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" Q# @1 v! q! ^5 ~/ T细胞冻存液配方呢？4 q" `8 `7 ~$ b3 G

7 s4 x) K- i% Q" G+ T是原代分离培养的NSCs用这种方法冻存和复苏？