干细胞标记GFP后的检测

422521181

大家好 标记GFP的干细胞在动物体内如何检测？我是将标有GFP（绿色荧光蛋白)的干细胞注入大鼠体内，然后检测体内干细胞的分布等，这如何检测啊 我现在只知道一种叫三维立体的荧光显像，实验室条件有限 做不到啊，请问各位高手，有别的方法检测吗？比如说免疫组化啥的？谢谢各位大侠

starlancer

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如果要老鼠活着，就只有用活体成像，如果可以把老鼠杀了，就用免疫荧光。但后者工作量较大。

422521181

回复 starlancer 的帖子9 N( y% K8 ~3 A  m0 k* k
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你说的做免疫荧光是说买荧光二抗吗？还是他直接的荧光表达？

starlancer

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9 |2 F# P3 F, s先试试直接观测 但如果是石蜡包埋通常效果不是很好，因此需要借助GFP一抗来增强效果，当然也要买对应的二抗。

422521181

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6 j$ G4 Q, c/ b' B
) n7 C6 r% M9 |* h4 U7 c你说的是取下标本来直接做冰冻切片然后做吗，还是？加你的QQ吧，我的是422521181

frank110

提出一点异议，如果已经处死大鼠了，组织切片了，切片中有些细胞已经是携带GFP，不需要杂交抗体标记二抗就可以用激光显微镜看到发光的细胞啊，最好还染个DAPI啊

Sophia

回复 422521181 的帖子0 _, e+ g7 e0 Y

- s& O7 @$ V: I你好！我也在做这方面的实验，想请教几个个问题，你将干细胞注入大鼠体内是直接注射的吗？还是先将大鼠经射线照射？如果照射，那你照射的射线剂量是多少？你注射的细胞是体外培养的，还是取得干细胞直接注射？注射的细胞量是多少？你那有没有相关文献，能分享一下？谢谢！

yaoyaoyatou

GFP的信号，如果体内活体成像的话，老鼠的自发荧光干扰很大，所以几乎是看不到显著信号的，如果要活体成像就需要大于600的发射波长才可以避开自发荧光。建议猝死老鼠后，免疫组化分析。

yaoyaoyatou

另外，我也做类似的工作，我希望有兴趣的同行，加QQ一起交流。

422521181

回复 starlancer 的帖子  F2 E* D+ P1 w: F1 q( q5 l' h

+ l* W6 u4 Y1 E我听说有直接做冰冻切片然后在荧光显微镜下观察的 这种方法可行吗？ 这对组织有什么特殊要求吗？还是按正常的冰冻切片程序就好了 ？还有 观察的时候具体咋操作啊 谢谢