间充质干细胞复苏问题

xuehu20

间充质干细胞150cm2的瓶中培养，融合度90%时冻存的，冻存液为DMSO:血清=1：9，复苏时在37度水浴锅中融化成半冰半水状态，倒入预冷的DMEM培养基中1500转离心10min，胎盘蓝染色细胞存活率75%，可是培养一天换液后发现细胞全漂着，咋办啊？救命啊

呆呆鱼

啊，好可怕，我刚刚也冻了一批细胞，按照文献用的是5%DMSO、30%FBS的冻存液，还没有复苏过，不太清楚能不能复苏成功，大家有什么经验的说一说吧。

yushi1105

有死细胞属正常 我养过大鼠的骨髓msc 小鼠的 以及人的 都有这样的情况 并且你们的复苏方式比我们要复杂一点 我们都是放在37水浴里面到融化 养起来的细胞状态也还好 祝你们顺利

luoziwei

台盼蓝染色还能有75%的成活率，第二天换液就漂了？你确定台盼蓝染色的结果是这样的？这个情况我们都没遇见过，难道是你把台盼蓝染色后的细胞再拿去继续培养？

luoziwei

台盼蓝染色还能有75%的成活率，第二天换液就漂了？你确定台盼蓝染色的结果是这样的？这个情况我们都没遇见过，难道是你把台盼蓝染色后的细胞再拿去继续培养？

luoziwei

台盼蓝染色对细胞毒性大

xuehu20

回复 luoziwei 的帖子4 \  h' \* f0 P

  s, A1 v$ q7 `9 P6 ]6 y1 m不是染色的细胞死了，是培养瓶中的全死了！惨啊

deron

台盼蓝拒染只能证明细胞膜完整，也就是说，只要细胞膜完整，凋亡小体也可以拒染掉台盼蓝。几乎所有人养的MSC，复苏都不见起色。

tangyvhuang

xuehu20 发表于 2011-1-7 10:30
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; [0 h6 y. [' ~- z) ~7 i3 [我们是40度水浴融化的，直接融化为液体，加入大约五倍量的培养基里面离心收集细胞，水浴融化的时候一定要快，我通常是用止血钳夹住管口不停的摇晃使其快速融化，

农夫有点田

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2 H, S$ a- S% e- O! I( s9 H( c, ]; H/ v( _9 K4 F
你这离心时都不见培养基洗一下啊 DMSO对细胞毒性很大的 知道么