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bingo

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楼主

发表于 2011-1-12 20:09 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

购买了Sigma的BrdU粉剂，货号是B5002。想检测细胞的增殖情况，有哪位同学做过这类实验啊？请赐教！！查找了网上的protocal，千差万别~被整晕了。

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runsong

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沙发

发表于 2011-1-13 21:37 |只看该作者

关键是用盐酸处理硼砂修复

BrdU-IF.pdf

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白衣小彩

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藤椅

发表于 2011-1-13 21:43 |只看该作者

我做的活体标记，你是标培养的细胞？文献里可作参考，建议还是先取些细胞标着试下，光想走不出晕的

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gqs2872022

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发表于 2011-1-15 15:20 |只看该作者

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楼主说的应该是活体实验，个人认为首先注射时确定是腹腔，如果不小心是皮下的话就没效果了。然后是选择剖检的时间点的问题，文献上提供的好像是24h，但不同的小鼠，不同的实验环境，有可能动物的营养状况和应激情况不同，也就可能导致小鼠体内细胞增殖的时间点不大一致，所以时间点的选择是比较重要的问题。剖检后组织固定时间不宜过长，24H内比较合适。接下来石蜡制片，后面Brdu染色步骤和免疫组化类似，只是在脱蜡至水后用盐酸处理、硼酸钠PH8.5平衡，后面有的可以不用抗原修复，有的需要按照组化的抗原修复法进行修复。重要的是要做过才知道哪些地方需要改进，好好努力吧！