SP分选的细节问题

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+ ^5 T" g4 M" V# F8 s; x0 Q: w一般情况下做SP分选是不需要染PI的，如果一定要区分死活细胞，可以通过流式的前向和侧向散色光来区分，或者用脉冲宽度信号或面积信号均可区分，并且可以区分粘连细胞。如果非要染上PI，一般染20-30分钟左右即可。; A) A& \; G+ G& c. c$ T6 \' N
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sp染色和分选中，对于分选的成功与否，最关键的问题是四点：! A7 W! K6 u, i% k/ P/ \
1，染色时的温度，保持在37度水浴；. @" c0 f5 g. j" P' R# c
2，染色时间：90分钟左右；
9 ]& P# A; q- w7 N4 Y3，Hoechst33342的浓度：50ug/l；
* L( K" w  `3 T. f4 B# ?2 M4，染色均匀，要时常振荡，使细胞能充分染色。5 B) Y6 K; Q) m. ^: Z
此外，需加一管加verapamil，50umol/ml的做对照管。
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- V0 l' y: K, b/ D# K3 K" u* s8 e" V8 H
我们这做得很多，现在干细胞也是热门，经典的“拖尾”就是弱染侧群嘛，有很多图都是很漂亮的，这一般跟染色有关系，不同的细胞染色的Hoechst33342的浓度不一样，一般得摸一个实验条件，做个浓度梯度！再就是跟染色过程中的是否染色均匀也有很多的关系。我们用的是目前全球据说是最顶级的分选流式细胞仪，型号是MoFlO XDP

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( p$ Q* I5 |% Q
" T  w+ {) ]2 V% d% I$ d罗丹明不是DNA染料吧？有报道罗丹明B以沟槽方式与单双链DNA相作用，但随DNA的浓度增加，发射能量减弱，如果做SP不合适吧？不就都成了弱染了。。。我们这没用过，你能否把这方面报道的文献发一份给我：rd6-sysucc@qq.com
5 |2 D8 n2 b) h多谢！

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回复 shandazlj 的帖子7 i5 a: j; ^- I2 l. U( S) s

# Q1 J+ _9 a1 {( G7 }: |广州。。。貌似不是一般的远。。