免疫组化中的封闭液作用是什么？原理是什么？

bin

      做免疫组化时在加一抗之前先加封闭液37度孵育30分钟，想请教各位大侠，封闭液的作用是什么？其具体原理是什么？怎么选择封闭液？

nydfy

      因为支持介质会非特异的结合某些蛋白，其中就包括你的一抗，封闭液可以与非特异位点结合，减少或几乎没有一抗的非特异性结合。一般可以选择BSA、脱脂奶粉等。可能的话使用二抗来源动物的血清效果会更好，尤其是在免疫荧光中。

jhu132llh

抗体封闭液中包含有大量的蛋白质，可以和你的样品蛋白充分的结合；当你加上特异性抗体时，你的特异性抗体就会特异竞争性的和特异性的抗原结合，从而有效的避免抗体和非特异性的抗原结合而造成假阳性结果。
, i3 ?0 i, g& p. F% y/ I一般的抗体封闭液是5%的脱脂奶粉或者1-10%血清，最好的是二抗来源动物的血清。

bin

谢谢各位大侠了。

luoziwei

常用的封闭液：western blotting可用脱脂奶粉，经济划算，但不是超市卖的一般奶粉，需要特殊的奶粉。免疫荧光常用的则有羊血清，驴血清，马血清等等，浓度1:200稀释。

鹭岛之滨

BSA和脱脂奶比较经济哦

jinyiran

封闭血清一般是和二抗同一来源的，不能与一抗同一来源。血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。 0 r/ V& x; y' c% n; _7 U$ J

gqs2872022

       组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加制备第 二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清白蛋白（胎牛血清最好），可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。 也可用除制备第一抗体以外的其它动物血清 (非免疫的)。有明显溶血的血清不能对消除背景的非特异性染色有很好的效果。+ L3 F2 ?/ \, E& p2 Q* @. b. a5 N
      封闭血清的原理主要有两点，第一是待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。" k2 u/ m6 z, m- ?0 I